[發明專利]一種豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗用稀釋液

在審

• 申請號: 201611071407.9
• 申請日: 2016-11-29
• 公開（公告）號: CN106620689A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 沈建軍;張秀文;李陽
• 申請（專利權）人: 浙江美保龍生物技術有限公司
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/12;A61K47/36;A61K47/18;A61P31/14
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙)33213
• 代理人: 沈淵琪

技術領域

本發明屬于獸用生物制品技術領域，具體涉及一種豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗用稀釋液。

背景技術

豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起豬的一種高度接觸性傳染病，不同年齡、品種和性別的豬均可感染，該病以母豬繁殖障礙、仔豬呼吸道癥狀、免疫抑制、高感染率、高死亡率為特征的一種高致病性疫病。該病已給全球養豬業造成嚴重的經濟損失。

為了有效地控制豬繁殖與呼吸綜合征，國內已開發多種用于預防PRRS的疫苗。在PRRS活疫苗研制中，疫苗毒株、病毒培養條件和免疫增強劑是研發有效疫苗的關鍵，其中，添加免疫增強劑是提高疫苗效力的有效途徑。疫苗稀釋劑是指用于對疫苗進行稀釋并用于免疫的試劑，不僅可以對疫苗進行稀釋，還可以對疫苗有保護作用和提高疫苗的免疫效果。

PRRS活疫苗在使用時需要用疫苗稀釋劑進行稀釋，目前通常選用注射用水或生理鹽水，但這樣稀釋出的疫苗，免疫效價整齊度不高，不同批次疫苗間的差異較大，且接種發病豬后存在應激反應和過敏反應，大大降低了PRRS活疫苗的免疫效果。

發明內容

為了彌補現有技術的不足，本發明所要解決的技術問題是提供一種豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗用稀釋液，該稀釋液可有效減少不同批次疫苗間的差異，提高疫苗抗體效價整齊度，減少接種發病豬的應激反應和過敏反應。

為解決上述技術問題，本發明包括磷酸鹽緩沖液以及溶解于磷酸鹽緩沖液的中藥多糖組分，其中每1000ml PH=7的磷酸鹽緩沖液中包含以下中藥多糖組分：桑葉多糖1-8g、云芝多糖0.1-5g、地黃多糖1-5g和胸腺五肽0.1-5g。

進一步的，作為優選本發明每1000ml PH=7的磷酸鹽緩沖液中包含以下中藥多糖組分：桑葉多糖2-6g、云芝多糖0.5-2g、地黃多糖1-3g和胸腺五肽0.5-1g。

其中，本發明中所述桑葉多糖的制備包括以下步驟：

（1）將桑葉粉碎后過70-100目篩，得桑葉粉末，置于干燥環境中貯存備用；

（2）將步驟（1）中所得桑葉粉末按料液比1:20-50g/ml加入75-85℃水中浸提100-120min，每間隔20-30min攪拌一次；

（3）對步驟（2）中浸提完畢的料液進行過濾，收集濾液；對所得濾液進行減壓濃縮得濃縮液，減壓濃縮條件為：溫度50-60℃，轉速50r/min,真空度600-700mmHg；

（4）向步驟（3）中所得濃縮液中加入無水乙醇，于4℃冰箱中醇沉20-24h后，以5000-6000 r/min的轉速離心15-20min，收集不溶物；

（5）利用無水乙醚對步驟（4）中所得不溶物浸洗5-8次，再加入蒸餾水，離心，收集澄清液；

（6）對步驟（5）中所得澄清液進行真空冷凍干燥，得桑葉多糖。

本發明中所述云芝多糖的制備包括以下步驟：

a. 將干燥的云芝碎片置于90-100℃水中煮提9-10h，過濾，收集濾液；

b．將步驟a中所得濾液濃縮至原體積的1/2，再加入3-4倍體積的95%乙醇，置于25-27℃環境中靜置沉淀20-24h，得沉淀液；

c．將步驟b中所得沉淀液3000-4000r/min的轉速離心15-20min，將所得沉淀物置于常溫下干燥，即得云芝多糖。

本發明中所述地黃多糖的制備包括以下步驟：

A．稱取地黃，按料液比1：30-40g/ml加入蒸餾水，加熱至90-110℃，浸提2-3h，過濾，收集濾液；

B．將步驟A中所得濾液濃縮至原體積的1/3-1/2，用sevag試劑法除去蛋白，上清液加氯仿離心，水層加80%-90%乙醇沉淀，沉淀物分別用丙酮和乙醇洗滌2 次，真空干燥得地黃多糖。

本發明中所述pH=7的磷酸鹽緩沖液的制備方法如下：

d．稱取下列原料組分：氯化鈉6-10g、氯化鉀0.05-0.5g、磷酸氫二鈉1-1.2g、磷酸二氫鉀0.05-0.5g、氯化鈣0.05-0.2g和六水氯化鎂0.05-0.2g，混合均勻備用；

e．向步驟d中所得原料組分的混合物中加入1000mL的雙蒸水，充分溶解后，在116℃條件下高壓滅菌30min，即得pH=7的磷酸鹽緩沖液。