[發(fā)明專利]癌癥相關(guān)基因表達差異檢測試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611069151.8
• 申請日: 2016-11-29
• 公開（公告）號: CN106755330B
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 亓垚
• 申請（專利權(quán)）人: 上海芯超生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 上海市匯業(yè)律師事務(wù)所 31325
• 代理人: 王函

本發(fā)明提出了一種癌癥相關(guān)基因表達差異檢測試劑盒及其應(yīng)用。其檢測試劑盒包括；cDNA模板，所述cDNA模板由人類癌癥組織及其相應(yīng)癌旁組織抽提的RNA反轉(zhuǎn)錄得到；以及管家基因引物，所述管家基因引物為管家基因β?actin的正向及反向引物一對。其應(yīng)用為檢測試劑盒的檢測方法。本發(fā)明具有樣本通量高、檢測快速準(zhǔn)確、靈敏度高的特點，可以快速準(zhǔn)確靈敏的檢測目的基因在大量癌癥樣本中的表達情況，并且根據(jù)樣本的臨床信息及隨訪信息，研究人員可進行各種相關(guān)性的統(tǒng)計學(xué)分析。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及試劑盒及其應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，特別是指一種癌癥相關(guān)基因表達差異檢測試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

近年來，癌癥與心血管系統(tǒng)疾病，呼吸系統(tǒng)疾病及糖尿病均排在致死疾病前列，十年來癌癥發(fā)病率也呈上升趨勢。據(jù)國家癌癥中心統(tǒng)計數(shù)據(jù)，2015年中國癌癥總發(fā)病429.16萬例，總死亡281.42萬例，肺癌和胃癌位居全國癌癥發(fā)病及死亡的前兩位。男性所有腫瘤發(fā)病率2000年至2011年略顯穩(wěn)定(年增長0.2％)，女性則較為顯著(年增長2.2％)。目前根據(jù)各種癌癥的預(yù)后大體可分為三類情況：第一類，早期治療可以達到根治；第二類，早期發(fā)現(xiàn)可以達到較好的療效但即使是早期手術(shù)仍有一定比例的病例發(fā)生轉(zhuǎn)移；第三類，整體療效提高不明顯。因此，進一步研究癌癥的發(fā)生發(fā)展機制，尋找新的腫瘤標(biāo)志物和探索新的靶向藥物，已成為癌癥研究亟待解決的三大問題。

癌癥的發(fā)生發(fā)展是一個非常復(fù)雜的基因與環(huán)境相互作用的過程，研究表明，促癌基因或抑癌基因的表達發(fā)生改變影響著大多數(shù)癌癥的發(fā)生發(fā)展。因此，高效準(zhǔn)確的檢測基因的表達差異，成為研究癌癥的發(fā)生發(fā)展，尋找新的腫瘤標(biāo)志物以及探索癌癥個性化治療的一個重要步驟。

目前用來進行基因差異表達的檢測方法有Northern雜交(Northern blotting)，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcription PCR)以及基因芯片等，每種方法都有各自的優(yōu)缺點。Northern雜交法可以對目標(biāo)轉(zhuǎn)錄本的大小和含量進行檢測，但是通量較小。基因芯片也是利用核算雜交的原理，將大量探針固定于支持物上，可以一次性對樣品大量序列進行檢測和分析，從而解決了傳統(tǒng)核酸印跡雜交(Southern Blotting和NorthernBlotting等)技術(shù)操作繁雜、檢測通量小、檢測效率低等不足。但是由于存在非特異雜交的可能，所以基因芯片的靈敏度和準(zhǔn)確性也會受到影響，因此許多研究人員使用RT-PCR的方法對基因芯片的結(jié)果進行驗證。RT-PCR一直是人們長期以來用于檢測基因表達的一項技術(shù)，具有快速靈敏的特點。易降解的RNA首先逆轉(zhuǎn)錄成穩(wěn)定的cDNA，以此為模板進行聚合酶鏈?zhǔn)綌U增。隨著技術(shù)的發(fā)展，實時熒光PCR(real-time PCR)技術(shù)也被用來做定量分析，它們比普通PCR進行定量分析時靈敏度更高，定量更精確，因此更多的為研究人員所使用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提出一種癌癥相關(guān)基因表達差異檢測試劑盒及其應(yīng)用，解決了現(xiàn)有技術(shù)中通量較小或靈敏度和準(zhǔn)確性較差的技術(shù)問題。

本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的：

一種癌癥相關(guān)基因表達差異檢測試劑盒，包括：

cDNA模板；

管家基因引物，所述管家基因引物為管家基因β-actin的正向及反向引物一對。

其中所述cDNA模板是由人類癌癥組織及其相應(yīng)癌旁組織抽提的RNA反轉(zhuǎn)錄得到的。所有組織cDNA模板來源病人的臨床資料。

作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述管家基因β-actin的正向及反向引物為SEQ ID NO：1-2所示序列的核苷酸鏈或其互補鏈。

作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述管家基因β-actin的序列為SEQ ID NO：3所示序列的核苷酸鏈或其互補鏈。

作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述癌癥相關(guān)基因表達差異檢測試劑盒采用DNA聚合酶，所述DNA聚合酶為無核酸外切酶活性，包括5’核酸外切酶活性和3’核酸外切酶活性。