[發明專利]癌癥相關基因表達差異檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201611069151.8
• 申請日: 2016-11-29
• 公開（公告）號: CN106755330B
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 亓垚
• 申請（專利權）人: 上海芯超生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 上海市匯業律師事務所 31325
• 代理人: 王函

1.一種癌癥相關基因表達差異檢測試劑盒，其特征在于，包括：多個樣本的cDNA模板，所述cDNA模板由帶有癌癥病人完整臨床信息的人類癌癥組織及其相應癌旁組織抽提的經純化、質檢后的RNA反轉錄得到，所有樣本的cDNA經過精確的定量和均一化；以及管家基因引物，所述管家基因引物為管家基因β-actin的正向及反向引物一對；該試劑盒利用分析軟件對目的基因的表達量與樣本的臨床信息進行相關性分析；所述cDNA模板的制備如下：提取病人癌癥和癌旁組織的RNA；在所述的RNA中加入基因組DNA酶消化殘留在其中的基因組DNA，經過純化后，收集總 RNA；對純化過后的RNA進行質量檢測，挑選出高質量的RNA；利用RNA反轉錄酶，合成cDNA；之后加入容器中，凍干即得cDNA模板。

2.根據權利要求1所述的一種癌癥相關基因表達差異檢測試劑盒，其特征在于，所述管家基因β-actin的正向及反向引物為SEQ ID NO：1-2所示序列的核苷酸鏈或其互補鏈。

3.根據權利要求1所述的一種癌癥相關基因表達差異檢測試劑盒，其特征在于，所述管家基因β-actin的序列為SEQ ID NO：3所示序列的核苷酸鏈或其互補鏈。

4.根據權利要求1所述的一種癌癥相關基因表達差異檢測試劑盒，其特征在于，所述癌癥相關基因表達差異檢測試劑盒采用DNA聚合酶，所述DNA聚合酶為無核酸外切酶活性，包括5’核酸外切酶活性和3’核酸外切酶活性。

5.根據權利要求1所述的一種癌癥相關基因表達差異檢測試劑盒，其特征在于，所述癌癥相關基因表達差異檢測試劑盒采用PCR反應程序，PCR反應程序中PCR循環時的退火溫度低于正向及反向引物的Tm值。

6.根據權利要求1所述的一種癌癥相關基因表達差異檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒的檢測方法包括以下步驟：利用聚合酶鏈式反應體系，經過變性打開DNA雙鏈，根據引物的Tm值選擇退火和延伸溫度進行DNA的退火和延伸，此過程中上下游引物會特異的與cDNA的目的區域結合，并進行核苷酸鏈式聚合反應，最后進行熒光收集；通過實時熒光定量的方法來檢測目的基因的表達；并且利用分析軟件對目的基因的表達量與樣本的臨床信息進行相關性分析；其中所述聚合酶鏈式反應體系中包含帶有癌癥病人完整臨床信息的癌癥和癌旁組織提取的cDNA模板，及一對管家基因β-actin的正向及反向引物。