[發明專利]一種構建哮喘免疫耐受模型的方法

在審

• 申請號: 201611064253.0
• 申請日: 2016-11-28
• 公開（公告）號: CN108114272A
• 公開（公告）日: 2018-06-05
• 發明（設計）人: 施天昀;何燕超;孫偉;揭志軍
• 申請（專利權）人: 上海市第五人民醫院
• 主分類號: A61K38/38
• 分類號: A61K38/38;A01K67/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及動物模型構建領域，公開了一種構建哮喘免疫耐受模型的方法，包括以下步驟，A.建立免疫耐受小鼠模型：讓幼鼠每日飲用含質量分數為0.5?1.5％OVA的無菌水，連續7日，每24h更換飲用水，第八日開始飲用無菌水；第15日予以腹腔注射125ul含質量分數為0.5?1.5％OVA致敏小鼠，第22日開始予以含質量分數為0.5?1.5％的OVA霧化激發小鼠1個小時，連續7日；B.免疫耐受小鼠模型的鑒定。本發明通過給剛斷奶的小鼠口服OVA直接獲得對OVA的免疫耐受，明顯縮短了構建哮喘免疫耐受模型的時間，也減少了構建模型的步驟，大大提高了效率。本發明解決了現有技術中母乳耐受構建模型的時間非常長，給母鼠霧化，后期給小鼠霧化等步驟非常繁瑣，耗資大的技術問題。

技術領域

本發明涉及動物模型構建領域，尤其涉及了一種構建哮喘免疫耐受模型的方法。

背景技術

國際上通用的雞卵清蛋白(OVA)構建哮喘免疫耐受模型的方法大多為母乳耐受，即給剛生完小鼠的母鼠OVA霧化，小鼠在通過母鼠乳汁間接地獲得對OVA的免疫耐受,斷奶之后獲得OVA免疫耐受的小鼠再次接觸OVA過敏源不會產生哮喘，而未獲得OVA免疫耐受的小鼠再次接觸OVA過敏源會產生哮喘表現。

發明內容

本發明針對現有技術的缺點，提供了一種構建哮喘免疫耐受模型的方法。

為了解決上述技術問題，本發明通過下述技術方案得以解決：

一種構建哮喘免疫耐受模型的方法，包括以下步驟，

A.建立免疫耐受小鼠模型：讓幼鼠每日飲用含質量分數為0.5-1.5％OVA的無菌水，連續7日，每24h更換飲用水，第八日開始飲用無菌水；第15日予以腹腔注射125ul含質量分數為0.5-1.5％OVA致敏小鼠，第22日開始予以含質量分數為0.5-1.5％的OVA霧化激發小鼠1個小時，連續7日；

B.免疫耐受小鼠模型的鑒定。

本發明通過給剛斷奶的小鼠口服雞卵清蛋白(OVA)直接獲得對OVA的免疫耐受，明顯縮短了構建哮喘免疫耐受模型的時間，也減少了構建模型的步驟，大大提高了效率。

作為優選，步驟A中，幼鼠為3-4周齡的小鼠。

作為優選，步驟A中，幼鼠為3-4周齡的SPF級BALB/c雌性小鼠。

作為優選，步驟A中，小鼠每日飲用含質量分數為1％OVA的無菌水。

作為優選，步驟A中，第15日予以腹腔注射125ul含質量分數為1％OVA致敏小鼠。

作為優選，步驟A中，第22日開始予以含質量分數為1％的OVA霧化激發小鼠1個小時。

作為優選，步驟B中，免疫耐受小鼠模型的鑒定包括測定OVA特異性IgE含量。

作為優選，步驟B中，免疫耐受小鼠模型的鑒定包括，

a.進行支氣管肺泡灌洗、進行細胞計數和分類、測定氣管肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ細胞因子的含量；

b.右肺組織勻漿抽提RNA，用時實定量PCR測定步驟a中細胞因子的mRNA的表達。

作為優選，步驟B中，左肺組織進行蘇木素-伊紅、高碘酸-席夫氏病理染色。