[發明專利]一種基于定性濾紙的三維肝模型的藥物肝毒性評價方法

有效

• 申請號: 201611063241.6
• 申請日: 2016-11-28
• 公開（公告）號: CN108118079B
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: 秦建華;王亞清;王麗
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司 21001
• 代理人: 鄭虹

1.一種基于定性濾紙的三維肝模型的藥物肝毒性評價方法，其特征在于：按照以下步驟進行：

（1）定性濾紙的三維肝模型的建立： 將濾紙置于細胞培養24孔板中，在其上包被一層100 ug/ml濃度的I型鼠尾膠原，然后在其上面先后種上hiHep肝細胞和臍靜脈內皮細胞HUVEC，兩種細胞共培養10天后，得到具有三維組織表型特征和肝特異性功能的肝模型，

（2）藥物肝毒性評價：在上述模型分別加入兩種臨床口服藥對進行不同藥物濃度和時間點的處理，檢測細胞活力和細胞分泌的LDH水平，用于藥物引起的肝毒性急/慢性評估，并與二維培養的hiHep肝細胞的藥物肝毒性檢測進行對比；

所述肝模型形成的三維組織表型特征，分別以掃描電鏡和蘇木素-伊紅染色方法觀察組織的三維形態，具體為：取在濾紙上培養第14天的肝組織進行電鏡掃描，觀察三維組織結構形成；分別取在濾紙上培養7天的肝組織和HUVEC細胞進行蘇木素-伊紅染色，觀察肝細胞和內皮細胞的形態。

2.按照權利要求1所述一種基于定性濾紙的三維肝模型的藥物肝毒性評價方法，其特征在于：所述兩種臨床口服藥分別為對乙酰氨基酚和吡格列酮。

3.按照權利要求1所述一種基于定性濾紙的三維肝模型的藥物肝毒性評價方法，其特征在于：所述不同藥物濃度為：對乙酰氨基酚的濃度梯度：0.5mM, 1mM, 2mM, 4mM；吡格列酮的濃度梯度：1uM, 10uM, 50uM, 100uM；二者均溶于DMSO中，對照組選取含有0.1% DMSO濃度的不含血清的hiHep培養基。

4.按照權利要求1所述一種基于定性濾紙的三維肝模型的藥物肝毒性評價方法，其特征在于：所述不同時間點的處理為：兩種藥物在三維肝組織模型上的處理時間分別是2天、4天和6天；在二維培養的hiHep中的處理時間分別是24小時和48小時。

5.按照權利要求1所述一種基于定性濾紙的三維肝模型的藥物肝毒性評價方法，其特征在于：所述細胞活力檢測使用CCK-8試劑盒檢測。

6.按照權利要求1所述一種基于定性濾紙的三維肝模型的藥物肝毒性評價方法，其特征在于：所述細胞LDH水平檢測使用LDH比色法檢測試劑盒檢測。