[發明專利]啟動子文庫及其構建方法

有效

• 申請號: 201611061295.9
• 申請日: 2016-11-24
• 公開（公告）號: CN106754866B
• 公開（公告）日: 2020-03-17
• 發明（設計）人: 李霞;李飛飛;李炳志;元英進
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12N15/81;C12Q1/6806;C12Q1/02;C40B50/06;C40B40/06
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

1.一種啟動子文庫的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

截取啟動子區域；

分析酶切位點，設計引物；

擴增獲得啟動子片段；

取所述啟動子片段與表達載體構建重組載體；

取所述重組載體轉化宿主并篩選；

獲得目標啟動子；

所述啟動子區域來源于釀酒酵母S288c V號染色體DNA序列；

構建重組載體具體為：取所述啟動子片段插入表達載體報告基因的上游，基于IIs型限制性核酸內切酶和環裝聚合酶延伸法組連接組裝，構建重組載體；

所述截取啟動子區域具體為：

對于同向相鄰兩蛋白編碼基因間隔區小于800bp～1200bp的DNA序列，取其間隔序列作為啟動子區；

對于間隔區長度不小于1200bp的，取5’上游1200bp作為啟動子區；

所述分析酶切位點為分析是否含有IIs型限制性核酸內切酶位點；

所述IIs型限制性核酸內切酶為BsaI或BsmBI；

所述設計引物具體為：

對于不含BsaI酶切位點的啟動子序列，依據其序列截取5’和3’各20bp左右，設計含BsaI酶切位點引物；

對于含有BsaI酶切位點的啟動子序列，不含有BsmBI酶切位點的DNA序列，依據其序列截取5’和3’各20bp左右，設計含BsmBI酶切位點引物；

對于既含有BsaI和BsmBI酶切位點的啟動子序列，采用CPEC方式構建表征載體，依據其序列截取5’和3’各20bp左右并引入表達載體的同源片段作為引物；

所述引物的序列如SEQ ID No.7～10、SEQ ID No.12～13、SEQ ID No.15～16中任一所示。

2.根據權利要求1所述的構建方法獲得的啟動子文庫。

3.根據權利要求2所述的啟動子文庫，其特征在于，包括啟動子序列，所述啟動子序列如SEQ ID No.1～6、SEQ ID No.11、SEQ ID No.14、SEQ ID No.19～39所示。

4.根據權利要求2或3所述的啟動子文庫在獲得不同強度類型啟動子中的應用。