[發明專利]一種抗HIV/AIDS的基因打靶載體及構建方法和應用在審
| 申請號： | 201611055288.8 | 申請日： | 2016-11-25 |
| 公開（公告）號： | CN108103095A | 公開（公告）日： | 2018-06-01 |
| 發明（設計）人： | 朱煥章;季海燕 | 申請（專利權）人： | 復旦大學 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N5/10;C12N15/65 |
| 代理公司： | 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吳桂琴 |
| 地址： | 200433 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 病毒基因 毒株 構建 感染 切除 宿主 基因打靶載體 人造血干細胞 生物工程領域 抗HIV感染 打靶載體 輔助受體 免疫細胞 載體修飾 靶細胞 染色體 靶向 敲除 位點 病毒 調控 應用 | ||
1.一種抗HIV/AIDS的基因打靶載體，其特征在于，該基因打靶載體是通過靶向敲除CCR5分子并在破壞位點定向插入靶向多數HIV-1病毒亞型基因LTR構建的調控型ZFN表達載體即pCCR5 donor-LTR-ZFN質粒；所述的基因打靶載體其由如下成分構成：
⑴用于敲除CCR5基因的上、下游同源臂；
⑵靶向病毒LTR的調控型ZFN表達元件；
⑶利于富集基因修飾細胞的篩選標記基因MGMTP140K表達元件。
2.根據權利要求1所述的抗HIV/AIDS的基因打靶載體，其特征在于，該基因打靶載體中，采用構建的pEbackbone為重組表達載體。
3.根據權利要求1所述的抗HIV/AIDS的基因打靶載體，其特征在于，該基因打靶載體中，重組質粒pCCR5 donor-LTR-ZFN中所攜帶的ZFN核苷酸片段是靶向病毒LTR。
4.根據權利要求1所述的抗HIV/AIDS的基因打靶載體，其特征在于，該基因打靶載體中，用于富集基因修飾細胞的篩選基因MGMTP140K在宿主細胞中安全、靈敏的進行篩選。
5.根據權利要求4所述的抗HIV/AIDS的基因打靶載體，其特征在于，所述的宿主細胞是靜止細胞或者分裂細胞。
6.權利要求3所述的抗HIV/AIDS的基因打靶載體在用于經該載體修飾的艾滋病感染的人造血干細胞或免疫細胞中的用途。
7.按權利要求6所述的用途，其特征在于，所述的用途是，由于CCR5分子的敲除可阻斷CCR5嗜性毒株的感染，以及，對CXCR4嗜性毒株或漏入的病毒、潛伏感染在宿主靶細胞染色體中的前病毒基因進行切除。
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