[發明專利]快速鑒別食腺嘌呤節孢酵母菌株的DNA條形碼引物、DNA條形碼、試劑盒、方法和應用

有效

• 申請號: 201611047408.X
• 申請日: 2016-11-23
• 公開（公告）號: CN108118098B
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 田飛;唐蜀昆;職曉陽;高林瑞;徐平;施佳輝;高慧英;丁章貴
• 申請（專利權）人: 勐海茶業有限責任公司;云南大益微生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 北京天昊聯合知識產權代理有限公司 11112
• 代理人: 王靜;丁業平

本發明屬于物種和菌株鑒定領域，具體涉及一種用于鑒別食腺嘌呤節孢酵母菌株的DNA條形碼引物組合物、DNA條形碼組合物、試劑盒、方法及應用。本發明的DNA條形碼組合物，包括如SEQ ID No.1所示的第一DNA條形碼、如SEQ ID No.2所示的第二DNA條形碼、以及如SEQ ID No.3所示的第三DNA條形碼，其中所述第一、第二和第三DNA條形碼來源于食腺嘌呤節孢酵母TMCC 70007菌株的基因組。該DNA條形碼能夠快速鑒別普洱茶發酵菌株食腺嘌呤節孢酵母TMCC 70007，可以快速準確地將該菌株從易混淆的菌株或同物種內其他菌株中鑒定出來。

技術領域

本發明屬于物種和菌株鑒定領域，具體涉及一種用于鑒別食腺嘌呤節孢酵母菌株的DNA條形碼引物組合物、DNA條形碼組合物、試劑盒、方法及應用。

背景技術

普洱茶是一種具有云南地理標識的后發酵茶，其采用大葉種曬青毛茶作為原料，經過一系列工藝制作而成。普洱茶因具有減肥、降血糖血脂、預防和改善心血管疾病、抗衰老、抗癌、消炎、助消化以及養胃等保健功效也備受人們關注。最近幾年，普洱茶越來越受歡迎，逐漸增加的市場需求拉動了普洱茶產業的發展，促進了云南地區的經濟增長。

普洱茶是云南大葉種發酵茶，其發酵生產需要普洱茶發酵生產菌株食腺嘌呤節孢酵母(Blastobotrys adeninivorans)TMCC 70007(以下也簡稱為“TMCC 70007”)在內的多種微生物的作用，其中該TMCC 70007是發酵過程中的關鍵菌。目前普洱茶發酵仍然是半自然人工渥堆的經驗式發酵，雖然渥堆過程中以少數優勢微生物為主的群落相對穩定，但產品的穩定性還存在較大的提升空間。生產過程中也不可避免的存在著一定的安全隱患，為了進一步獲得消費者的青睞和市場的認可、突破外貿壁壘、提升普洱茶企業的市場競爭力，必須實現普洱茶生產工藝的人工可控化、清潔化以及高效化，并不斷開發新產品、延伸產業鏈。要做到這些，就必須革新技術，發明一系列安全、清潔、高效、人工可控自動化的普洱茶新工藝，才能確保普洱茶產業的健康發展，給國家和人民帶來長遠利益。

隨著普洱茶科研的進一步深入，越來越多的人們開始了人工接種發酵普洱茶的探索，目前已經有許多菌株應用于普洱茶人工可控發酵。近年由于市場需求加大，許多規模較小的廠家對普洱茶缺乏系統深入的研究，大肆濫用許多他人專利進行牟利，比如，按照一些接種發酵普洱茶的專利方法，采用一些菌種進行普洱茶發酵等一系列方法，進行普洱茶加工生產等經營活動，大大損害了一些具有相關專利的普洱茶生產企業的經濟利益。

為確保普洱茶發酵微生物種質資源得到有效保護，防止濫用普洱茶發酵微生物的侵權行為發生，解決在普洱茶人工可控發酵過程中菌種侵權時難以舉證的難題，開發對普洱茶發酵用菌株進行快速精準鑒別的方法勢在必行，亟需建立其分子鑒定方法，開發通過DNA條形碼技術快速鑒別與區分與其相似菌株的方法，以達到通過形態特征與分子數據分析相結合的方法來解決工業生產菌株鑒別和鑒定問題，為普洱茶有控工業發酵工藝開發和資源保護提供理論依據，促進普洱茶產業健康繁榮發展。

發明內容

為了克服形態學鑒定用于普洱茶發酵生產的食腺嘌呤節孢酵母菌株所存在的不足，以及基于ITS序列和18S rRNA序列難以區分種內不同菌株的缺陷，本發明提供了一組食腺嘌呤節孢酵母的DNA條形碼，所述DNA條形碼能夠快速鑒別普洱茶發酵菌株食腺嘌呤節孢酵母TMCC 70007，可以快速準確地將該菌株從易混淆的菌株或同物種內其他菌株中鑒定出來。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

根據本發明的第一方面，提供了一種用于鑒別食腺嘌呤節孢酵母菌株的DNA條形碼組合物，包括如SEQ ID No.1所示的第一DNA條形碼、如SEQ ID No.2所示的第二DNA條形碼、以及如SEQ ID No.3所示的第三DNA條形碼，其中所述第一、第二和第三DNA條形碼來源于食腺嘌呤節孢酵母TMCC 70007菌株的基因組。

根據本發明的第二方面，提供了用于鑒別食腺嘌呤節孢酵母菌株的 DNA條形碼引物組合物，包括以下三對引物對：