[發(fā)明專利]快速鑒別食腺嘌呤節(jié)孢酵母菌株的DNA條形碼引物、DNA條形碼、試劑盒、方法和應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201611047408.X | 申請日： | 2016-11-23 |
| 公開（公告）號： | CN108118098B | 公開（公告）日： | 2021-07-13 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 田飛;唐蜀昆;職曉陽;高林瑞;徐平;施佳輝;高慧英;丁章貴 | 申請（專利權(quán)）人： | 勐海茶業(yè)有限責(zé)任公司;云南大益微生物技術(shù)有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京天昊聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11112 | 代理人： | 王靜;丁業(yè)平 |
| 地址： | 666200 云南省西雙*** | 國省代碼： | 云南;53 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 快速 鑒別 嘌呤 酵母 菌株 dna 條形碼 引物 試劑盒 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種用于鑒別食腺嘌呤節(jié)孢酵母TMCC 70007菌株的DNA條形碼引物組合物，包括以下三對引物對：
第一引物對：
正向引物DnaJ-F：5'-CAAAGGCTGAGAGCCGAGAT-3'，
反向引物DnaJ-R：5'-CCTCGGGCATCCGAAATCTT-3'；
第二引物對：
正向引物WD40-F：5'-TCTCAAACCTGTCATGGGGC-3'，
反向引物WD40-R：5'-TTCTTGATCGGCTTGGGGAC-3'；以及
第三引物對：
正向引物ARPC4-F：5'-GGGAACGTACAGGTTGCTCA-3'，
反向引物ARPC4-R：5'-CGCTTGTCCCGCACTTCTAA-3'；
其中，所述第一引物對為如SEQ ID No.1所示的第一DNA條形碼的引物；所述第二引物對為如SEQ ID No.2所示的第二DNA條形碼的引物；所述第三引物對為如SEQ ID No.3所示的第三DNA條形碼的引物。
2.一種用于鑒別食腺嘌呤節(jié)孢酵母TMCC 70007菌株的試劑盒，包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的DNA條形碼引物組合物。
3.一種用于鑒別食腺嘌呤節(jié)孢酵母TMCC 70007菌株的方法，包括以下步驟：
a)提供待測菌株的基因組DNA；
b)以步驟a)所述的基因組DNA為模板，利用根據(jù)權(quán)利要求1所述的第一、第二和第三引物對進行PCR擴增，如果未得到由所述三對引物分別擴增得到的PCR產(chǎn)物，則確定所述待測菌株不是食腺嘌呤節(jié)孢酵母菌株TMCC 70007；如果得到由所述第一、第二和第三引物對分別擴增得到的第一、第二和第三PCR產(chǎn)物，則進行以下步驟；
c)對所得PCR產(chǎn)物進行測序，得到所述PCR產(chǎn)物各自的DNA序列，所述第一PCR產(chǎn)物的DNA序列為第一DNA序列，所述第二PCR產(chǎn)物的DNA序列為第二DNA序列，所述第三PCR產(chǎn)物的DNA序列為第三DNA序列；
d)將步驟c)得到的第一、第二和第三DNA序列按順序依次進行拼接，得到待測序列；將分別如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的第一、第二和第三DNA條形碼按順序依次進行拼接，得到標準序列；將所述待測序列與所述標準序列進行序列同源性比對，如果序列同源性小于99％，則確定待測菌株不是食腺嘌呤節(jié)孢酵母菌株TMCC70007；如果序列同源性大于或等于99％，則確定待測菌株為食腺嘌呤節(jié)孢酵母菌株TMCC70007。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，還包括e)將所述待測序列與所述標準序列進行聚類分析，所述聚類分析為構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，如果所述待測序列與所述標準序列經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育樹分析后，待測菌株與TMCC70007菌株處于同一個分支，且進化距離相同，則確定待測菌株為食腺嘌呤節(jié)孢酵母菌株TMCC 70007。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中由所述第一引物對擴增得到的第一PCR產(chǎn)物的長度為816bp；由所述第二引物對擴增得到的第二PCR產(chǎn)物的長度為581bp；由所述第三引物對擴增得到的第三PCR產(chǎn)物的長度為863bp。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述PCR擴增的程序為：1)94℃-96℃預(yù)變性8分鐘；2)94℃-96℃變性45秒，55℃-57℃退火45秒，72℃延伸1分15秒，其中該程序2)進行30-35個循環(huán)；3)72℃延伸10分鐘。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的DNA條形碼引物組合物在鑒別食腺嘌呤節(jié)孢酵母TMCC 70007菌株中的應(yīng)用。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于勐海茶業(yè)有限責(zé)任公司;云南大益微生物技術(shù)有限公司，未經(jīng)勐海茶業(yè)有限責(zé)任公司;云南大益微生物技術(shù)有限公司許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201611047408.X/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
