[發明專利]一種測定魚飼料中姜黃素含量的方法有效

申請號：	201611043767.8	申請日：	2016-11-11
公開（公告）號：	CN106770710B	公開（公告）日：	2019-11-15
發明（設計）人：	劉永濤;艾曉輝;楊紅;董靖;胥寧;楊移斌;楊秋紅	申請（專利權）人：	中國水產科學研究院長江水產研究所
主分類號：	G01N30/02	分類號：	G01N30/02
代理公司：	42001 武漢宇晨專利事務所	代理人：	王敏鋒<國際申請>=<國際公布>=<進入
地址：	430223湖北省武***	國省代碼：	湖北;42
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摘要：
搜索關鍵詞：	魚飼料離心管姜黃素濃縮瓶雙去甲氧基姜黃素去甲氧基姜黃素振蕩標準曲線氮氣吹干合并提取液體過濾靈敏度復溶液提取液超聲復溶基質下層濃縮重復
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【權利要求書】：

1.一種測定魚飼料中姜黃素含量的方法，其步驟是：

A、魚飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素采用試劑A 15-30mL提取，經旋轉蒸發儀將試劑揮干；

B、再經試劑B 1～10mL復溶旋轉蒸發后的殘渣，將復溶溶液轉移到一支10mL塑料離心管中置40℃氮吹儀上氮吹至干，向10mL塑料離心管中加入1mL定容溶液C溶解塑料管中的殘渣；

C、再加入1mL試劑D，渦旋振蕩30s，7000r/min離心5min，將上層液體棄去；

D、用1mL注射器吸取下層液體過0.22μm聚醚砜水系濾頭，過濾液：溶解有雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的溶液C，1mL放置到2mL進樣瓶中，超高效液相色譜紫外法測定，獲得雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的色譜圖，通過色譜圖積分得出雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的峰面積；

E、超高效液相色譜紫外法條件：流動相的有機相為試劑A，水相為溶液E，試劑A與溶液E的兩者的體積比為45:55，流速為0.3mL/min，柱溫為30℃，檢測波長為430nm，色譜柱：超高效液相色譜柱ACQUITY UPLC BEH C18，進樣量為5.0μL，獲得雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的色譜圖，通過色譜圖積分得出雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的峰面積，再將峰面積代入魚飼料基質標準曲線方程，計算出魚飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的含量；

F、魚飼料基質標準曲線的繪制，分別在不含雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的魚飼料中添加系列濃度的雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素后得到系列濃度的魚飼料基質標準，以其濃度分別為橫坐標X₁，X₂，X₃，雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的峰面積分別為縱坐標Y₁，Y₂，Y₃，繪制魚飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的基質標準曲線，獲得魚飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的基質標準曲線方程；

G、將測定魚飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的峰面積值代入基質標準曲線中，計算得到魚飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的含量；魚飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的含量超出本基質標準曲線的濃度范圍，將前處理后得到的液體用定容溶液C稀釋后進行測定，將測定值代入基質標準曲線方程計算得出濃度值再乘以稀釋倍數即得到雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的含量；

所述的試劑A為乙腈；

所述的試劑B為乙醇；

所述的溶液C為試劑A和溶液E按體積比1:1混合而成；

所述的試劑D為正己烷；

所述的溶液E為0.1％乙酸水溶液。

2.根據權利要求1所述的一種測定魚飼料中姜黃素含量的方法，其特征在于：計算得到魚飼料中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素的含量：魚飼料中雙去甲氧基姜黃素含量的計算公式為X₁＝(Y₁+1800.7)/309.65，濃度范圍為10μg/kg～10000μg/kg；魚飼料中去甲氧基姜黃素含量的計算公式為X₂＝(Y₂+3340.6)/260.88，濃度范圍為10μg/kg～10000μg/kg；魚飼料中姜黃素含量的計算公式為X₃＝(Y₃+14903)/1256.06，濃度范圍為10μg/kg～10000μg/kg；X₁為雙去甲氧基姜黃素的含量，X₂為去甲氧基姜黃素的含量，X₃為姜黃素的含量；Y₁為雙去甲氧基姜黃素的峰面積，Y₂為去甲氧基姜黃素的峰面積，Y₃為姜黃素的峰面積。