[發明專利]一種離體體液中蛋白質的預處理方法

在審

• 申請號: 201611043619.6
• 申請日: 2016-11-21
• 公開（公告）號: CN108088727A
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發明（設計）人: 張麗華;袁輝明;隨志剛;楊開廣;張玉奎
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N1/34
• 分類號: G01N1/34;G01N30/02
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種離體體液中蛋白質的預處理方法，其特征在于：

1）在離體血液和/或尿液中加入高分子聚合物溶液在-20-10℃下提取體液蛋白質；

2）加入表面活性劑和蛋白質還原劑在80-95℃下使蛋白質快速變性；

3）再加入可與蛋白質巰基反應的固相烷基化試劑使體液蛋白質得到分離，獲得體液蛋白質，最后加入蛋白酶將體液蛋白質酶解成肽段；

所述固相烷基化試劑為表面共價鍵合碘乙酸-N-琥珀酰胺酯的聚合物微球或表面共價鍵合碘乙酸-N-琥珀酰胺酯硅球。

2.按照權利要求1所述的預處理方法，其特征在于：加入高分子聚合物溶液在低溫條件下提取體液中的蛋白質，其中高分子聚合物為聚合度500-10000的聚乙二醇、聚醚酰亞胺和聚乙烯醇中的一種或兩種以上，高分子聚合物溶液的質量濃度為1%-50%；高分子聚合物溶液與離體血液和/或尿液的體積比1：1-10。

3.按照權利要求1所述的預處理方法，其特征在于：加入表面活性劑溶液和蛋白質還原劑在80-95℃下使體液蛋白質變性；其中表面活性劑的種類為陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑、兩性離子表面活性劑和非離子表面活性劑中的一種或兩種以上，濃度為4%-10%，濃度單位為g/mL；表面活性劑溶液與步驟1）獲得溶液的體積比1：1-10；蛋白質還原劑為二硫蘇糖醇或三(2-羧乙基)膦中一種或兩種，還原劑終濃度為10 mM-100 mM; 步驟3）中的蛋白質提取溫度范圍為80-95℃。

4.按照權利要求3所述的預處理方法，其特征在于：加入表面活性劑溶液和蛋白質還原劑在80-95℃下使體液蛋白質變性；其中表面活性劑為十二烷基醇聚氧乙烯醚硫酸鈉, 十二烷基苯磺酸, 十二烷基硫酸鈉, 脂肪醇羥乙基磺酸鈉, 十二烷基硫酸銨中的一種或兩種以上；或者為十八烷基三甲基氯化銨,十六烷基三甲基氯化銨,二硬脂基羥乙基甲基硫酸甲脂銨中的一種或兩種以上；或者為十二烷基甜菜堿,椰油基咪唑啉脂肪醇,聚氧乙烯醚,磺基琥珀酸二鈉鹽中的一種或兩種以上；或者為椰油脂肪酸二乙醇酰胺, 壬基酚聚氧乙烯醚羥基合成醇,聚氧乙烯醚, C12-14烷基糖苷中的一種或兩種以上。

5.按照權利要求1所述的預處理方法，其特征在于：加入可與蛋白質巰基快速反應的固相烷基化試劑使體液蛋白質得到分離，獲得體液蛋白質，其中固相烷基化試劑為表面共價鍵合碘乙酸-N-琥珀酰胺酯的聚合物微球或表面共價鍵合碘乙酸-N-琥珀酰胺酯硅球，蛋白質與固相烷基化試劑的質量比為1/1-1/5；聚合物微球基質材料為聚丙烯酸酯, 聚苯乙烯中的一種或兩種以上。

6.按照權利要求1所述的預處理方法，其特征在于：所采用的蛋白質酶可為胰蛋白酶、賴氨酸蛋白酶和蛋白酶V8中的一種或兩種或三種；體液蛋白質與酶加入質量比為1/1-1/5，酶解溫度為25-37℃，酶解時間為0.5-4小時。