[發明專利]云南臭蛙皮膚抗氧化多肽AOP?OA2及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201611043231.6
• 申請日: 2016-11-24
• 公開（公告）號: CN106632644A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 王瀅;楊新旺;唐璟;李小潔;楊美鳳
• 申請（專利權）人: 云南民族大學
• 主分類號: C07K14/46
• 分類號: C07K14/46;C07K1/20;C07K1/16
• 代理公司: 北京匯捷知識產權代理事務所(普通合伙)11531
• 代理人: 李宏偉

1.一種云南臭蛙皮膚抗氧化多肽AOP-OA2，其特征在于，所述抗氧化多肽AOP-OA1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一種云南臭蛙皮膚抗氧化多肽AOP-OA2的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)原料預處理：取云南臭蛙皮膚分泌物，溶解于質量濃度為0.9％的生理鹽水，真空冷凍干燥，-80℃保存備用；

2)Sephadex G50分子篩：將步驟1)中制備得到的云南臭蛙皮膚分泌物凍干粉溶解于去離子水中，上Sephadex G50柱子，用Tris-HCl緩沖液進行洗脫，流速為2.0毫升/10分鐘，每10分鐘收集一管，測定其在280nm下的吸光度，收集合并具有抗氧化活性的洗脫峰；

3)高效液相色譜反相層析：將步驟2)中制備得到的洗脫液上樣于Hypersil ODS2柱子，實驗儀器為Waters 1525高壓液相系統，在流速為1毫升/分鐘的條件下，用乙腈在線性梯度條件下進行洗脫，監測波長為215納米，收集合并具有抗氧化活性的洗脫峰，濃縮干燥后得到目標物。

3.根據權利要求2所述的云南臭蛙皮膚抗氧化多肽AOP-OA2的制備方法，其特征在于，步驟2)中的Sephadex G50柱子預先用20mM、pH6.8、含0.1M NaCl的Tris-HCl緩沖液平衡24小時。

4.根據權利要求2所述的云南臭蛙皮膚抗氧化多肽AOP-OA2的制備方法，其特征在于，步驟3)中的Hypersil ODS2色譜柱需預先用含體積濃度為0.1％三氟乙酸的超純水平衡。

5.根據權利要求2所述的云南臭蛙皮膚抗氧化多肽AOP-OA2的制備方法，其特征在于，步驟3)中的乙腈為含0.1％三氟乙酸的乙腈。

6.根據權利要求2所述的云南臭蛙皮膚抗氧化多肽AOP-OA2的制備方法，其特征在于，步驟3)中的線性梯度洗脫具體為：乙腈濃度從0％升至60％所消耗的時間為60min。

7.一種如權利要求1所述的云南臭蛙皮膚抗氧化多肽AOP-OA2在制備與抗氧化相關藥物、保健品、化妝品中的應用。