[發明專利]誘導臍帶血單個核細胞分化為粒系細胞的方法

有效

• 申請號: 201611043102.7
• 申請日: 2016-11-21
• 公開（公告）號: CN106754712B
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發明（設計）人: 裴雪濤;岳文;陳琳;謝小燕;聶紀芹;姚海雷;南雪;王思涵;裴海云;張博文;曲洺逸
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院野戰輸血研究所;華南生物醫藥研究院
• 主分類號: C12N5/0787
• 分類號: C12N5/0787;C12N5/0789
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

1.一種誘導臍帶血單個核細胞分化為粒系細胞的方法，其特征在于，包括：

利用第一培養基對所述臍帶血單個核細胞進行擴增培養，以便得到擴增后的造血干細胞；以及

利用第二培養基對所述擴增后的造血干細胞進行誘導培養，以便得到所述粒系細胞，

所述第一培養基為stemspan培養基，

所述第二培養基為含有第一添加物的X-VIVO^TM15培養基，且所述第一添加物為重組人血小板生成素、重組人干細胞因子以及重組人粒細胞集落刺激因子；

所述stemspan培養基含有第二添加物，所述第二添加物為重組人血小板生成素、重組人干細胞因子、重組人白細胞介素-3、重組人白細胞介素-6、芳香烴受體抑制劑和芳香烴受體拮抗劑的增強劑；

在所述第二培養基中，

所述重組人血小板生成素的濃度為30～100ng/mL；

所述重組人干細胞因子的濃度為30～100ng/mL；

所述粒細胞集落刺激因子的濃度為30～100ng/mL；

在所述第一培養基中，

所述重組人血小板生成素的濃度為5～20ng/mL；

所述重組人干細胞因子的濃度為30～100ng/mL；

所述重組人白細胞介素-3的濃度為10～50ng/mL；

所述重組人白細胞介素-6的濃度為10～50ng/mL；

所述芳香烴受體抑制劑的濃度為0.3～0.8μM；

所述芳香烴受體拮抗劑的增強劑的濃度為0.3～0.8μM；

所述擴增培養的時間為5～10天；

所述誘導培養的時間為14～25天。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在所述第二培養基中，

所述重組人血小板生成素的濃度為50ng/mL；

所述重組人干細胞因子的濃度為50ng/mL；

所述粒細胞集落刺激因子的濃度為50ng/mL。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在所述第一培養基中，

所述重組人血小板生成素的濃度為10ng/mL；

所述重組人干細胞因子的濃度為50ng/mL；

所述重組人白細胞介素-3的濃度為20ng/mL；

所述重組人白細胞介素-6的濃度為20ng/mL；

所述芳香烴受體抑制劑的濃度為0.5μM；

所述芳香烴受體拮抗劑的增強劑的濃度為0.5μM。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述擴增培養的時間為7天。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述誘導培養的時間為21天。

6.一種用于誘導臍帶血單個核細胞分化為粒系細胞的試劑盒，其特征在于，包括：

第一培養基，所述第一培養基用于對所述臍帶血單個核細胞進行擴增培養，以便得到擴增后的造血干細胞；以及

第二培養基，所述第二培養基用于對所述擴增后的造血干細胞進行誘導培養，以便得到所述粒系細胞，

其中，所述第一培養基選自權利要求1～5任一項所述的誘導臍帶血單個核細胞分化為粒系細胞的方法中的第一培養基；

所述第二培養基選自權利要求1～5任一項所述的誘導臍帶血單個核細胞分化為粒系細胞的方法中的第二培養基。

7.一種用于誘導臍帶血單個核細胞分化為粒系細胞的系統，其特征在于，包括：

第一培養裝置，所述第一培養裝置用于利用第一培養基對所述臍帶血單個核細胞進行擴增培養，以便得到擴增后的造血干細胞；以及

第二培養裝置，所述第二培養裝置用于利用第二培養基對所述擴增后的造血干細胞進行誘導培養，以便得到所述粒系細胞，

其中，所述第一培養基選自權利要求1～5任一項所述的誘導臍帶血單個核細胞分化為粒系細胞的方法中的第一培養基；

所述第二培養基選自權利要求1～5任一項所述的誘導臍帶血單個核細胞分化為粒系細胞的方法中的第二培養基。