[發明專利]誘導臍帶血單個核細胞分化為粒系細胞的方法

有效

• 申請號: 201611043102.7
• 申請日: 2016-11-21
• 公開（公告）號: CN106754712B
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發明（設計）人: 裴雪濤;岳文;陳琳;謝小燕;聶紀芹;姚海雷;南雪;王思涵;裴海云;張博文;曲洺逸
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院野戰輸血研究所;華南生物醫藥研究院
• 主分類號: C12N5/0787
• 分類號: C12N5/0787;C12N5/0789
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

本發明公開了一種誘導臍帶血單個核細胞分化為粒系細胞的方法、試劑盒及系統。所述誘導臍帶血單個核細胞分化為粒系細胞的方法包括：利用第一培養基對所述臍帶血單個核細胞進行擴增培養，以便得到擴增后的造血干細胞；以及利用第二培養基對所述擴增后的造血干細胞進行誘導培養，以便得到所述粒系細胞，所述第一培養基為spemspan培養基，所述第二培養基為含有第一添加物的X?VIVO^TM15培養基，且所述第一添加物包括重組人血小板生成素、重組人干細胞因子以及重組人粒細胞集落刺激因子。本發明的方法能夠獲得大量粒系細胞，誘導分化效率較高。

技術領域

本發明涉及生物工程領域。具體地，本發明涉及誘導臍帶血單個核細胞分化為粒系細胞的方法。更具體地，本發明涉及誘導臍帶血單個核細胞分化為粒系細胞的方法、試劑盒及系統。

背景技術

粒系細胞是血液非特異性免疫系統的重要組成部分，特別是中性粒細胞，在非特異性免疫應答中執行重要的生理功能，當炎癥發生時，具有趨化作用的中性粒細胞，到達炎癥部位，吞噬微生物病原體，由于中性粒細胞內含有大量溶酶體酶，能將吞噬入細胞內的細菌和組織碎片分解、殺滅。化學藥物、電離輻射(放化療)、嚴重感染等原因會導致骨髓損傷和粒系細胞減少。粒系細胞缺乏常導致頭暈、乏力，此外還可出現嚴重感染癥狀，感染部位以肺、尿路、皮膚等多見，易發生膿毒血癥或敗血癥，死亡率可達25％。中性粒細胞減少癥是由于外周血中性粒細胞數量減少而產生的綜合征，是腫瘤治療中最常見的并發癥，在接受化療的實體腫瘤病人中發生率為10％-20％，死亡率達到9.8％。造血干細胞誘導分化粒細胞為臨床應用提供新的途徑。

然而，目前粒系細胞的擴增及誘導體系還存在誘導分化效率低、細胞數量少等問題，仍有待研究。

發明內容

本發明旨在至少在一定程度上解決現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明提出了一種誘導臍帶血單個核細胞分化為粒系細胞的方法、試劑盒及系統。利用該方法、試劑盒和系統能夠獲得大量粒系細胞，誘導分化效率較高。

為此，在本發明的一個方面，本發明提出了一種誘導臍帶血單個核細胞分化為粒系細胞的方法。根據本發明的實施例，所述方法包括：利用第一培養基對所述臍帶血單個核細胞進行擴增培養，以便得到擴增后的造血干細胞；以及利用第二培養基對所述擴增后的造血干細胞進行誘導培養，以便得到所述粒系細胞，所述第一培養基為spemspan培養基，所述第二培養基為含有第一添加物的X-VIVO^TM15培養基，且所述第一添加物包括重組人血小板生成素、重組人干細胞因子以及重組人粒細胞集落刺激因子。

發明人驚奇地發現，預先將臍帶血單個核細胞進行擴增培養，以獲得大量的造血干細胞，再對其進行誘導培養，以獲得大量的粒系細胞。采用上述兩階段培養的誘導模式獲得的粒系細胞量明顯高于直接將臍帶血單個核細胞進行誘導培養。進一步地，發明人發現，第一培養基成分及第二培養基成分顯著影響誘導分化效率，若第一培養基成分及第二培養基成分不適于臍帶血單個核細胞擴增為造血干細胞及其分化為粒系細胞，會使得粒系細胞誘導分化效率較低。例如，若第一培養基成分不適，可能容易使得臍帶血單個核細胞擴增為造血干細胞的數量減少，從而導致粒系細胞得率偏低；若第二培養基成分不適，可能容易使得造血干細胞定向分化為粒系細胞的數量減少，也會導致粒系細胞得率偏低。為此，發明人經過深入研究得到最優第一培養基和第二培養基成分，由此，使得粒系細胞誘導分化效率較高，從而獲得大量粒系細胞。

根據本發明的實施例，上述誘導臍帶血單個核細胞分化為粒系細胞的方法還可以進一步具有下列附加技術特征：

根據本發明的實施例，所述spemspan培養基含有第二添加物，所述第二添加物包括：重組人血小板生成素、重組人干細胞因子、重組人白細胞介素-3以及重組人白細胞介素-6。由此，根據本發明實施例的方法能夠獲得大量造血干細胞，誘導分化效率較高。