[發(fā)明專利]一種用于檢測水稻橙葉病植原體的引物、方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611040208.1
• 申請(qǐng)日: 2016-11-11
• 公開（公告）號(hào): CN106755317B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周國輝;朱英芝;李戰(zhàn)彪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/689
• 分類號(hào): C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標(biāo)代理有限公司 44202
• 代理人: 王會(huì)龍

本發(fā)明提供一種用于檢測水稻橙葉病植原體的引物，所述用于檢測水稻橙葉病植原體的引物包括上游引物及下游引物，所述上游引物具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，所述下游引物具有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。本發(fā)明所述引物為檢測水稻橙葉病植原體的特異性引物，采用本發(fā)明所述特異性引物，只需要進(jìn)行一次PCR擴(kuò)增，通過電泳結(jié)果是否有特異性條帶即可確定檢測樣品是否被水稻橙葉植原體感染，不需要通過測序進(jìn)行確定，提高檢測的特異性、靈敏性，節(jié)約時(shí)間和經(jīng)濟(jì)成本，方法操作簡單，易于推廣。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于檢測水稻橙葉病植原體的引物、方法及應(yīng)用，屬于生物檢測領(lǐng)域。

背景技術(shù)

水稻橙葉病植原體屬于軟壁菌門(Tenericutes)柔膜菌綱(Mollicutes)植原體暫定屬[Candidatus(Ca.)genus Phytoplasma]。由水稻橙葉植原體引致的水稻橙葉病是水稻的一種重要的病害，該病害于上世紀(jì)60年代首次在泰國發(fā)現(xiàn)，隨后在馬來西亞、印度和菲律賓等等南亞國家和東南亞國家發(fā)生。上世紀(jì)80年代末和90年代初，該病在中國的廣東廣西等局部地區(qū)造成嚴(yán)重的水稻損失，當(dāng)時(shí)的研究表明，電光葉蟬是該病的唯一傳播介體，介體的因素限制了病害的大面積擴(kuò)散，參考文獻(xiàn)為：Hibino,H.,Jonson,G.B.,and Sta.Cruz,F.C.1987.Association of mycoplasmalike organisms with rice orange leaf in thePhilippines.Plant Dis.71:792-794.。2014年，Li等報(bào)導(dǎo)黑尾葉蟬是該病的新傳播介體，隨即該病在中國的華南稻區(qū)迅速擴(kuò)散，參考文獻(xiàn)為：Li,S.,Hao,W.,Lu,G.,Huang,J.,Liu,C.,and Zhou,G.2015.Occurrence and identification of a new vector of riceorange leaf phytoplasma in South China.Plant Dis.99:1-5.。2015年在中國廣東各主要稻區(qū)、海南中南部及廣西東部稻區(qū)發(fā)現(xiàn)該病，部分田塊病株率達(dá)到80％以上，對(duì)中國南方水稻生產(chǎn)構(gòu)成嚴(yán)重威脅，參考文獻(xiàn)為：何園歌，李舒，郝維佳，鄭靜君，鐘寶玉，周國輝.2016.水稻橙葉病分子檢測及其在華南地區(qū)的發(fā)生與分布研究,36：9-12.。

由于水稻橙葉病植原體為嚴(yán)格寄生病原菌，不能進(jìn)行體外純培養(yǎng)，因此目前對(duì)于水稻橙葉病植原體的鑒定只能利用植原體通用的16SrDNA巢氏引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增鑒定。由于16SrDNA為通用引物，因此擴(kuò)增的產(chǎn)物需要通過測序才能確定是否為水稻橙葉植原體，繁瑣的實(shí)驗(yàn)流程及昂貴的測序費(fèi)用大大限制了對(duì)水稻橙葉病的檢測及預(yù)測。而目前還未出現(xiàn)采用特異性引物檢測水稻橙葉病植原體的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處而提供一種簡便、快速、特異性強(qiáng)的檢測水稻橙葉病植原體的引物、方法及其應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：一種用于檢測水稻橙葉病植原體的引物，所述引物包括上游引物及下游引物，所述上游引物具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，所述下游引物具有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。