[發(fā)明專利]一種用于檢測水稻橙葉病植原體的引物、方法及應用

有效

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• 申請日: 2016-11-11
• 公開（公告）號: CN106755317B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發(fā)明（設計）人: 周國輝;朱英芝;李戰(zhàn)彪
• 申請（專利權）人: 華南農業(yè)大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 王會龍

1.一種用于檢測水稻橙葉病植原體的引物，其特征在于，所述用于檢測水稻橙葉病植原體的引物包括上游引物及下游引物，所述上游引物具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，所述下游引物具有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

2.一種用于檢測水稻橙葉病植原體的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)制備如權利要求1所述的用于檢測水稻橙葉病植原體的引物；

(2)提取待測樣品的總DNA；

(3)配制PCR反應體系，進行PCR反應；

(4)電泳檢測待測樣品中是否含有水稻橙葉病植原體。

3.如權利要求2所述的用于檢測水稻橙葉病植原體的方法，其特征在于，所述步驟(2)中提取待測樣品的總DNA的步驟為：

a.稱取0.1g待測樣本于研缽中，用液氮研磨成粉末狀后轉移至1.5mL離心管中，加入800μL的CTAB提取液，65℃溫育30min，期間混勻5-6次；

b.加入等體積氯仿，充分混勻后，12,000rpm離心15min；

c.取上清，加入等體積的異丙醇，-20℃靜置30min；

d.25℃離心15min后，將沉淀用75％乙醇洗2-3遍；

e.沉淀干燥后溶于50μL的滅菌ddH₂O中，溶解后將總DNA作為PCR擴增模板。

4.如權利要求2所述的用于檢測水稻橙葉病植原體的方法，其特征在于，所述步驟(3)中PCR反應體系為：PCR混合液25μL，其中2×Taq PCR StarMix with loading Dye 12.5μL，如上述所述兩條引物(使用濃度為10uM)各1μL，模板DNA 1μL及ddH₂O 9.5μL。

5.如權利要求2或4所述的用于檢測水稻橙葉病植原體的方法，其特征在于，所述步驟(3)中PCR反應體系中的總DNA模板濃度不低于10^-1ng/uL。

6.如權利要求2所述的用于檢測水稻橙葉病植原體的方法，其特征在于，所述步驟(3)中PCR反應的擴增程序：94℃預變性2min；隨后進行35個循環(huán)，每個循環(huán)包括94℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸60s；最后72℃延伸10min。

7.如權利要求2所述的用于檢測水稻橙葉病植原體的方法，其特征在于，所述步驟(3)中PCR反應的退火溫度為53℃-60℃。

8.一種用于檢測水稻橙葉病植原體的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒具有如權利要求1所述的引物。

9.一種用于檢測水稻橙葉病植原體的基因芯片，其特征在于，所述基因芯片具有如權利要求1所述的引物。

10.一種如權利要求1所述的引物在檢測水稻橙葉病植原體中的應用。