[發明專利]一種RGD靶向微泡造影劑

在審

• 申請號: 201611038561.6
• 申請日: 2016-11-23
• 公開（公告）號: CN108079322A
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發明（設計）人: 韓會義
• 申請（專利權）人: 韓會義
• 主分類號: A61K49/22
• 分類號: A61K49/22
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一種RGD靶向微泡造影劑，以“生物素?親和素”體系制備出RGD靶向微泡造影劑，分為10μg/ml RGD肽封閉組和30μg/ml RGD肽封閉組。測得的RGD靶向微泡粒徑為（4.09±0.07）μm。黏附在單個細胞表面的微泡數量分別降低54.64%和67.00%。在剪切應力1.5 dyne/cm2下，RGD靶向微泡在細胞表面黏附率隨著剪切應力增大而增加（P<0.05）。當剪切應力1.5 dyne/cm2時，RGD靶向微泡在細胞表面黏附率為（48.72±4.26）個，繼續增大剪切應力，黏附率降低（P<0.05）。RGD靶向微泡造影劑能特異性地黏附血管內皮細胞，有望作為超聲分子探針檢測評價整合素在腫瘤血管新生中的表達，用于腫瘤的早期診斷及預后檢測。

技術領域

本發明涉及一種造影劑，尤其涉及一種RGD靶向微泡造影劑。

背景技術

血管新生是在原有的血管基礎上長出新的毛細血管，存在于組織生長發育和修復過程，在腫瘤生長和新陳代謝中發揮重要作用。腫瘤血管新生標志物整合素ανβ3受體在腫瘤組織新生血管內皮細胞膜和大多數腫瘤細胞表面均呈高表達，但在成熟的血管內皮細胞中幾乎不表達。

同時，含有RGD（Arg-Gly-Asp）序列的細胞外基質蛋白能與整合素ανβ3受體結合，在腫瘤血管生成中起著重要作用。配體結合到超聲微泡造影劑表面，用于檢測腫瘤血管新生標志物整合素ανβ3表達。Ellegala等將整合素ανβ3抗體連接到微泡表面，并在荷瘤鼠模型中實現靶向顯像。此外，RGD序列對激活的血小板上表達GPIIB/IIIa具有極強的親和力，使早期發現動脈血栓成為可能。

發明內容

本發明的目的是為了解決腫瘤血管新生超分子成像問題，設計了一種RGD靶向微泡造影劑。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

RGD靶向微泡造影劑的制備原料：二硬脂酰磷脂酰膽堿（DSPC）、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000（DSPE-PEG2000）、DSPEPEG2000-Biotins；親和素（Streptavidinfromeggwhite）；c[RGDfk]Biotin和RGD多肽（CCRGDKGDPC-NH2），純度&gt;98%。

RGD靶向微泡造影劑的制備方法：DSPC、DSPE-PEG2000、DSPE-PEG2000-Biotins（摩爾比90∶5∶5）溶解于1ml氯仿中，混勻。室溫通入氮氣吹干，抽真空4h，完全除盡殘余氯仿。加入pH7.4的緩沖液5ml（Tris、甘油、1,2-丙二醇體積比為8∶1∶1）。置于60℃水浴超聲清洗儀內超聲10min，得到透明的脂質體溶液。西林瓶分裝5瓶，加蓋密封，抽真空15min，C3F8氣體置換。高頻振蕩儀機械振蕩45s，即完成生物素化微泡造影劑的制備。將制備好的生物素化微泡造影劑以400g/min離心4min，用PBS緩沖液洗滌，重復3次。抗生蛋白鏈菌素（Streptavidin）按每1×107個微泡加入3μg，室溫孵育15min，離心洗滌2次。c[RGDfk]Biotin按1×107個微泡加入7.5μg，室溫孵育15min，離心洗滌2次，即完成RGD靶向微泡造影劑的制備。

所述的靶向微泡造影劑是將抗體、多肽等特異性配體連接到微泡造影劑表面，使其能主動結合到靶組織或靶器官上相應的受體，產生特異性靶向顯影。

所述的多肽小分子化學穩定性較好、免疫原性低。

本發明的有益效果是：

RGD靶向微泡造影劑能特異性地黏附血管內皮細胞，有望作為超聲分子探針檢測評價整合素ανβ3在腫瘤血管新生中的表達，用于腫瘤的早期診斷及預后檢測。

具體實施方式

實施案例1：