[發(fā)明專利]一種凍干保護劑及其制備方法、使用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611036699.2
• 申請日: 2016-11-22
• 公開（公告）號: CN106754374B
• 公開（公告）日: 2019-11-12
• 發(fā)明（設計）人: 魯吉珂;林松洋;劉鑫;康巧珍;郝利民;魯來政
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12N1/20;C12R1/46;C12R1/25;C12R1/245;C12R1/225;C12R1/01
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 王加貴

本發(fā)明提供一種凍干保護劑及其制備方法，使用方法，用于解決現(xiàn)有技術中不同種乳酸菌菌種凍干保護劑的制備問題。本發(fā)明提供的一種凍干保護劑及其制備方法，使用方法，凍干保護劑直接來源于經(jīng)低溫冷凍預處理后的相應乳酸菌細胞，經(jīng)細胞破碎處理直接獲得；原料易得，制備工藝簡單，成本花費低，冷凍保護效果好，具有較強的工業(yè)化實施性。

技術領域

本發(fā)明涉及微生物保存技術領域，具體地，涉及一種凍干保護劑及其制備方法，使用方法。

背景技術

乳酸菌是食品工業(yè)中一種重要的微生物，廣泛應用于乳制品及肉制品發(fā)酵。為便于生產(chǎn)，高活力菌種常用冷凍干燥方法保存，其中凍干技術及相關冷凍保護劑開發(fā)非常關鍵。

但因目前國內真空冷凍干燥微生物的技術還不夠完善，凍干產(chǎn)品的活菌數(shù)還不夠高，冷凍干燥技術還處于發(fā)展階段。乳酸菌若直接進行冷凍干燥，死亡率將達90％以上，因此選擇合適的凍干保護劑至關重要。

凍干保護劑的保護作用與它們的化學結構有密切關系,其特征是具備三個以上的氫鍵或一些離子基團,它們能夠取代水與細菌蛋白質結合,保證了蛋白質的穩(wěn)定性,防止凍干時胞內胞外冰晶的形成。保護劑的持水性可使凍干過程中細胞的水分不至于急劇下降,而使細胞蛋白質結構免遭破壞,保護劑能將菌體包裹其中,減少菌體與氧接觸,降低細胞代謝,選擇保護劑的技術是制備冷凍干燥濃縮發(fā)酵劑的一項關鍵技術。

但由于不同種乳酸菌細胞的特異性、不同種保護劑的理化性質的特異性及二者相互作用的復雜性，單一保護劑單獨使用并不能滿足菌體抵抗外界惡劣條件的要求，而復配保護劑雖然保護效果較明顯但是篩選工作量極大，且同種復配型保護劑針對不同種乳酸菌保護效果也會不同，這又從另一方面增加了尋找冷凍保護劑的復雜程度，傳統(tǒng)的尋找外源性冷凍保護劑工作量大，方法繁瑣，且成本花費高。

發(fā)明內容

解決上述問題所采用的技術方案是一種凍干保護劑及其制備方法，使用方法。

本發(fā)明提供的一種冷凍保護劑的制備方法，包括以下步驟：

將培養(yǎng)至對數(shù)期的菌體進行階梯降溫處理；

將菌體進行洗滌離心處理,收集菌體；

將菌體破碎；

離心收集上清液，并進行凍干處理，獲得冷凍保護劑。

優(yōu)選的，所述的梯度降溫處理包括在31℃-0、0--45℃、-45--80℃，每個溫度梯度下冷凍處理0.5-5h。

優(yōu)選的，所述將菌體進行洗滌離心處理,收集菌體包括:

將菌體在轉速為5000rpm，離心時間為10-20min，溫度為0-6℃下進行離心；

用緩沖液洗滌，緩沖液為摩爾濃度0.05M的pH為6.63的Tris-HCl溶液，其中,菌體的質量和緩沖液的體積配比為1g：(30-50)ml。

優(yōu)選的，所述將菌體破碎包括:

采用超聲破碎,破碎條件為:功率為300-350w，超聲5s，停止5s，共超聲30min-60min。

優(yōu)選的，所述離心收集上清液，并進行凍干處理，獲得冷凍保護劑包括:

離心條件為6000-20000rpm，時間為10-20min，溫度為4℃。

優(yōu)選的，所述菌體為嗜熱鏈球菌、乳酸乳球菌、乳酸片球菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌、雙歧桿菌、德氏乳桿菌保加利亞亞種中的任一一種。

本發(fā)明的目的還在于提供一種凍干保護劑，是采用上述冷凍保護劑的制備方法制備的。

本發(fā)明的目的還在于提供一種凍干保護劑的使用方法，包括以下步驟：