[發明專利]一種凍干保護劑及其制備方法、使用方法有效
| 申請號： | 201611036699.2 | 申請日： | 2016-11-22 |
| 公開（公告）號： | CN106754374B | 公開（公告）日： | 2019-11-12 |
| 發明（設計）人： | 魯吉珂;林松洋;劉鑫;康巧珍;郝利民;魯來政 | 申請（專利權）人： | 鄭州大學 |
| 主分類號： | C12N1/04 | 分類號： | C12N1/04;C12N1/20;C12R1/46;C12R1/25;C12R1/245;C12R1/225;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務所 11569 | 代理人： | 王加貴 |
| 地址： | 450000 河南*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 凍干保護劑 制備 預處理 乳酸菌菌種 乳酸菌細胞 低溫冷凍 細胞破碎 制備工藝 實施性 冷凍 | ||
1.一種冷凍保護劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
將培養至對數期的菌體進行梯度降溫處理；
將菌體進行洗滌離心處理，收集菌體；
將菌體破碎；
所述菌體為乳酸乳球菌、乳酸片球菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌、雙歧桿菌、德氏乳桿菌保加利亞亞種中的任意一種；
離心收集上清液，并進行凍干處理，獲得冷凍保護劑。
2.如權利要求1所述的冷凍保護劑的制備方法，其特征在于，
所述的梯度降溫處理包括在31℃-0、0- -45℃、-45- -80℃，每個溫度梯度下冷凍處理0.5-5h。
3.如權利要求1所述的冷凍保護劑的制備方法，其特征在于，
所述將菌體進行洗滌離心處理，收集菌體包括：
將菌體在轉速為5000rpm，離心時間為10-20min，溫度為0-6℃下進行離心；用緩沖液洗滌，緩沖液為摩爾濃度0.05M的pH為6.63的Tris-HCl溶液，其中，菌體的質量和緩沖液的體積配比為1g：(30-50)ml。
4.如權利要求1所述的冷凍保護劑的制備方法，其特征在于，
所述將菌體破碎包括：
采用超聲破碎，破碎條件為:功率為300-350w，超聲5s，停止5s，共超聲30min-60min。
5.如權利要求1所述的冷凍保護劑的制備方法，其特征在于，
所述離心收集上清液，并進行凍干處理，獲得冷凍保護劑包括：
離心條件為6000-20000rpm，時間為10-20min，溫度為4℃。
6.一種凍干保護劑，其特征在于，是采用如權利要求1-5任一所述的冷凍保護劑的制備方法制備的。
7.如權利要求6所述的一種凍干保護劑的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：用緩沖液將凍干保護劑稀釋，至蛋白濃度為5-10μg/μl，獲得凍干保護劑溶液；將凍干保護劑溶液與菌體發酵液進行混合凍干，其中，凍干保護劑溶液與菌體發酵液的體積比為1:(4-10)。
8.如權利要求7所述的凍干保護劑的使用方法，其特征在于，所述的菌體發酵液為對數期的菌體發酵液。
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