[發明專利]一種快速、靈敏的檢測血液中依托咪酯的方法

在審

• 申請號: 201611033876.1
• 申請日: 2016-11-17
• 公開（公告）號: CN108072691A
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發明（設計）人: 王新;蔣丹丹;李海洋;李恩有;肖瑤
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62;G01N1/34;G01N1/38
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種快速、靈敏的檢測血液中依托咪酯的方法，檢測裝置為離子遷移譜檢測儀，其特征在于：

1)將依托咪酯藥物標準品溶解于離體血漿或離體血液中，配制成5個以上含不同血藥濃度的依托咪酯藥物樣本，樣本中依托咪酯藥物濃度處于0.5-20ng/μl，經過相同體積的有機溶劑萃取后，分別取體積A的有機相滴在進樣載片上，同時分別添加體積A的內標校準試劑，體積A的范圍為10-50μl；室溫(20-30℃)揮干溶劑后，利用離子遷移譜檢測儀，采用正離子高壓模式檢測分析，熱解析樣品被電離后，連續記錄離子到達離子遷移譜檢測器的遷移時間和信號峰強度離子遷移譜圖；

2)根據依托咪酯和內標試劑的遷移時間，記錄兩個峰的最大信號強度，然后樣品信號強度與內標信號強度求比值；根據血藥濃度與對應的信號強度比值擬合生成標準曲線方程；

3)取100-1000μL的注射依托咪酯藥物的人或動物的離體待測血液樣品，采用有機溶劑提取法，提取待測目標物；取體積A待測目標物滴在進樣載片上，同時添加體積A的內標校準試劑；室溫(20-30℃)揮干有機溶劑后，利用離子遷移譜檢測儀，采用正離子高壓模式檢測分析，熱解析樣品后，連續記錄離子到達離子遷移譜檢測器的遷移時間和信號峰強度離子遷移譜圖；計算樣品信號強度與內標信號強度求比值；

4)根據步驟1)中依托咪酯藥物和內標檢測所獲得的信號峰遷移時間確定待測血液樣品中依托咪酯藥物的信號峰和內標峰，對待測血液樣品中依托咪酯藥物定性；將步驟3)中比值帶入步驟2)中標準曲線方程，進一步確定血液中依托咪酯藥物的含量。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：由于人或動物的個體差異，進行待測血液樣品檢測前，應首先進行方法可行性確認：

檢測前進行標準品檢測：步驟1)實驗要進行血漿或血液樣品的背景信號空白測試，將血漿或血液樣品背景信號的遷移時間與上述目標物所獲得的遷移時間進行比對，若無重合峰證明此檢測方法可行，可繼續以下實驗過程；若有重合峰證明此檢測方法于此人或動物的血漿或血液樣品不可行。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：有機溶劑為乙酸乙酯或氯仿，離心提取時間1min以上；有機溶劑與血漿不互溶，但是血漿中的藥物成分卻易溶于提取劑中；同時保證血液中成分的提取物在遷移譜正離子模式下與目標峰無重疊干擾。

4.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：內標物屬于穩定的鈦酸酯類，且與血液基質沒有重疊峰可以完全分離開的鄰苯二甲酸二壬酯(DNP)或是鄰苯二甲酸二癸酯，溶劑為乙酸乙酯或氯仿，濃度為5-50ng/μl；通過內標校準可以排除儀器日間差異，保證數據重復性，實現精準定量。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：藥物空白添加形成的標準曲線方程是以血藥濃度為橫坐標，目標物最大信號強度與內標最大信號強度之比(或是解析面積之比)為縱坐標；熱解析信號采集時間為1-30S之內。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟1)將依托咪酯藥物標準品溶解于離體血漿或離體血液中，配制成含0.5、2.5、5、7.5、10、20ng/μl依托咪酯藥物樣本。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：離體血漿或離體血液為服藥前人或動物的血漿或血液；離體待測血液樣品為服藥后人或動物的血液；且它們來源相同，即來源個體相同。