[發(fā)明專利]一種用于鑒定甜瓜抗蔓枯病的專用引物及分子標(biāo)記方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611032338.0
• 申請(qǐng)日: 2016-11-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106701917B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-10-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 華德平;劉莉;付金玉;李三培;楊旭輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 王麗

1.一種鑒定甜瓜蔓枯病抗性專用引物，其特征是所述引物為從5`端到3`端的第1-22位的單鏈DNA序列的正向引物CAAAGACATGGCGAGAAATTTG；從5`端到3`端的第1-21位單鏈DNA序列的反向引物GAAGGACGGTTAGCTTTGAGG。

2.利用權(quán)利要求1的專用引物鑒定甜瓜蔓枯病抗性的分子標(biāo)記方法，其特征是步驟如下：

1)利用CTAB法提取甜瓜待測(cè)樣品的基因組DNA；

2)以步驟1)所得的待測(cè)樣品基因組DNA為模板，利用權(quán)利要求1所述的鑒定甜瓜蔓枯病抗性專用引物對(duì)不同材料進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得擴(kuò)增產(chǎn)物；

3)利用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)，對(duì)步驟2)所得的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，使不同大小的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物處于不同的位置；

4)利用銀染的方法檢測(cè)凝膠電泳的結(jié)果，經(jīng)過(guò)銀染，肉眼就可看到PCR擴(kuò)增的DNA片段在凝膠中的位置，距離上樣孔距離遠(yuǎn)的，是小的DNA片段105bp，距離上樣孔近的，為大的DNA片段135bp；

5)通過(guò)判斷片段大小，PCR擴(kuò)增片段較大的為抗蔓枯病的甜瓜材料，擴(kuò)增片段較小的為易感抗蔓枯病的甜瓜材料。