[發明專利]一種SO32-/HSO3-檢測試劑及其合成方法和應用

有效

• 申請號: 201611030085.3
• 申請日: 2016-11-15
• 公開（公告）號: CN106749142B
• 公開（公告）日: 2019-01-25
• 發明（設計）人: 陰彩霞;李曉琪;霍方俊
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: C07D311/16
• 分類號: C07D311/16;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 張福增

1.一種SO₃^2-檢測試劑，特征在于，其是(Z)-3-氯-3-(7-(二乙胺基)-2-氧-2-氫-色烯-3-基)丙烯醛，結構式為：

2.如權利要求1所述的一種SO₃^2-檢測試劑的合成方法，其特征在于，步驟為：

1)在冰浴下，往等體積的DMF溶液中緩慢滴加三氯氧磷，攪拌半小時，加入溶解在DMF中的摩爾量為三氯氧磷十分之一的3-(二乙胺基)苯酚，80℃回流5h；反應完成后，把反應液倒入三倍體積的冰水中，并用Na₂CO₃水溶液調節pH至中性，棕色固體析出，抽濾，水洗，最后用乙醇重結晶得到4-(二乙胺基)-間羥基苯甲醛；

2)將4-(二乙胺基)-間羥基苯甲醛和乙酰乙酸乙酯按摩爾比1：1.5混合，在含有少量哌啶的乙醇中回流10小時，濃縮、冷卻后減壓蒸餾得到黃色固體即為3-乙?；?7-(二乙胺基)-2氫-色烯-2-酮；

3)在冰浴下，將等體積的三氯氧磷緩慢滴加到DMF溶液中，攪拌半小時，當溶液顏色變成橘紅色，加入等體積的3-乙酰基-7-(二乙胺基)-2氫-色烯-2-酮的DMF溶液，繼續攪拌3h，然后將該體系在80℃回流6h；冷卻到室溫后將體系倒入兩倍體積的冰水中，并用Na₂CO₃水溶液調節pH至中性，抽濾，有磚紅色固體析出，然后以二氯甲烷作為洗脫劑柱層析分離得到最終產物，即得到SO₃^2-檢測試劑(Z)-3-氯-3-(7-(二乙胺基)-2-氧-2-氫-色烯-3-基)丙烯醛。

3.一種檢測SO₃^2-的方法，其特征在于，步驟為：

(1)、配制pH＝7.4、濃度為10mM的HEPES緩沖溶液，配制2mM的(Z)-3-氯-3-(7-(二乙胺基)-2-氧-2-氫-色烯-3-基)丙烯醛的DMSO溶液；

(2)、將1000μL pH 7.4的HEPES緩沖溶液、1000μL DMSO溶液和5μL(Z)-3-氯-3-(7-(二乙胺基)-2-氧-2-氫-色烯-3-基)丙烯醛的DMSO溶液加到干凈的熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，隨著待測樣的加入，486nm的熒光強度逐漸增強；

(3)、將1000μL pH 7.4的HEPES緩沖溶液、1000μL DMSO溶液和5μL(Z)-3-氯-3-(7-(二乙胺基)-2-氧-2-氫-色烯-3-基)丙烯醛的DMSO溶液加到另外七個熒光比色皿中，分別再加入體積為0.5、1、1.5、2、4、6、8μL的SO₃^2-溶液，在熒光分光光度儀上測定486nm對應的熒光強度F為493、792、1061、1327、2355、3250、4338，以SO₃^2-濃度為橫坐標，以熒光強度F為縱坐標繪制圖，得到SO₃^2-濃度的工作曲線；線性回歸方程為：F＝509.94c+257.86，c的單位為μM；

(4)、將1000μL pH 7.4的HEPES緩沖溶液、1000μL DMSO溶液和5μL(Z)-3-氯-3-(7-(二乙胺基)-2-氧-2-氫-色烯-3-基)丙烯醛的DMSO溶液加到干凈的熒光比色皿中，用微量進樣器吸取VμL待測樣品溶液，加入到此干凈的熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，將測得的熒光強度代入步驟(3)的線性回歸方程，得到濃度c，待測樣品C_待測樣＝2000μL×c×10^-6/VμL,即可求得SO₃^2-的濃度。