[發明專利]用于篩選強遷移能力的臍帶間充質干細胞的流式試劑盒有效
| 申請號： | 201611029636.4 | 申請日： | 2016-11-14 |
| 公開（公告）號： | CN106755262B | 公開（公告）日： | 2020-06-05 |
| 發明（設計）人： | 張碩;馬潔 | 申請（專利權）人： | 天津市康婷生物工程集團有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/02 | 分類號： | C12Q1/02;G01N15/14 |
| 代理公司： | 天津盛理知識產權代理有限公司 12209 | 代理人： | 趙瑤瑤 |
| 地址： | 300200 天津市*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 篩選 遷移 能力 臍帶 間充質 干細胞 試劑盒 | ||
1.一種用于篩選強遷移能力的臍帶間充質干細胞的流式試劑盒，其特征在于：試劑盒組成：具體說明如下：
⑴Standard Mixture：將ZPH-MMA30K型30微米標準微球溶于1.5mL蒸餾水，與F-13838型15微米標準微球相混合，超聲處理30s后振蕩混勻，存放于4℃條件下，得到StandardMixture；
⑵Isotype Mixture：將350μL的PE-IgG1k抗體、250μL的APC-IgG1k抗體、1150μL的FITC-IgG1k抗體、250μL的PerCP-Cy5.5-IgG1k抗體相混合，避光存放于4℃條件下，得到Isotype Mixture；
⑶Positive Mixture：將295μL的PE-CD105抗體、295μL的APC-CD73抗體、115μL的FITC-CD90抗體、295μL的PerCP-Cy5.5-CD166抗體相混合，避光存放于4℃條件下，得到PositiveMixture；
⑷Negative Mixture：將240μL的FITC-CD11b抗體、952μL的PE-CD34/FITC-HLA-DR抗體、952μL的PE-CD45抗體、952μL的PE-CD19抗體、952μL的PE-CD80抗體、952μL的PE-CD86抗體相混合，避光存放于4℃條件下。
2.根據權利要求1所述的用于篩選強遷移能力的臍帶間充質干細胞的流式試劑盒，其特征在于：操作步驟如下：
(1)取1.5*106量的臍帶間充質干細胞樣本，經離心、洗滌，用PBS重懸后制成密度為5*106cells/mL的細胞懸液A；
(2)取4支一次性流式上樣管，分別命名為STD管、ISO管、POS管、NEG管；
(3)向STD管加入0.5mL PBS，向ISO管、POS管、NEG管分別加入100μL細胞懸液A；
(4)向ISO管、POS管、NEG管分別加入20μL Isotype Mixture、10μL Positive Mixture、50μL Negative Mixture，在15℃條件下避光孵育30min；
(5)向ISO管、POS管、NEG管均加入2mL PBS，在15℃條件下200g離心3min后去除上清液，重復本步驟2次；
(6)將Standard Mixture超聲處理30s后振蕩混勻后取25μL加入至STD管，向ISO管、POS管、NEG管分別加入500μL PBS，將STD管、ISO管、POS管、NEG管振蕩混勻；
(7)依照STD管、ISO管、POS管、NEG管的順序上機檢測。
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