[發明專利]人工表皮片、其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201611026605.3
• 申請日: 2016-11-14
• 公開（公告）號: CN107338216A
• 公開（公告）日: 2017-11-10
• 發明（設計）人: 仁科博道;吳復躍;何振東
• 申請（專利權）人: 上海睿泰生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A61L27/38;A61L27/60;C12Q1/02
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司31100
• 代理人: 張靜

1.一種人工表皮片，其包含：活的黑素形成細胞和表皮細胞，其中，所述人工表皮片不包含動物源性的血清和蛋白質以及營養支持細胞。

2.如權利要求1所述的人工表皮片，其特征在于，所述人工表皮片不包含腦衍生物質和動植物源性的過敏原物質；在另一實施方式中，所述人工表皮片還包含用于支持所述黑素形成細胞和表皮細胞的支持材料，例如纖維蛋白凝膠。

3.一種制備人工表皮片的方法，其包括如下步驟：

(i)皮膚組織預處理：用酶溶液處理以分解皮膚組織，獲得包含活細胞的制備物；

(ii)細胞增殖與分化：使所得制備物中的細胞增殖，并分化為黑素形成細胞和表皮細胞，進一步使所述細胞多層化以形成含有黑素形成細胞的人工表皮片；

其中，所述方法不采用動物源性的血清、蛋白質以及營養支持細胞。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：在用酶溶液分解皮膚組織之后，采用酶抑制劑完全抑制胰蛋白酶活性，隨后進行細胞增殖與分化；在另一個實施方式中，所述方法還包括在細胞增殖與分化之后進行調配步驟，所述調配步驟將分化的細胞或碎片化的細胞皮片包埋進入適當載體，例如纖維蛋白中，獲得含有分化細胞的載體。

5.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述酶溶液包含蛋白水解酶，所述蛋白水解酶包括中性蛋白酶(例如，分散酶)、胰蛋白酶、膠原酶中的一種或多種。

6.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述分化過程中，逐步將分化培養液相對于增殖培養液的占比提高，例如，細胞分化過程中添加的分化培養液與增殖培養液的體積比從1:2逐步過渡至全部為分化培養液，例如從1:1到2:1，再到3:1，最終達到全部為分化培養液；優選地，所述分化培養液在基礎培養液的基礎上還包含：胰島素、促腎上腺皮質激素、全鐵轉鐵蛋白和維生素D。

7.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述細胞增殖的過程中，對所述細胞的傳代不超過5代；其中，傳代后采用的增殖培養液在傳代前采用的增殖培養液的基礎上另添加干細胞培養因子SCF和Wnt-3a。

8.如權利要求3-7中任一項所述的方法制備獲得的人工表皮片。

9.如權利要求1所述的人工表皮片或如權利要求8所述的人工表皮片在制備針對以皮膚黑素細胞缺失為特征的疾病(例如，白癜風)或狀況的產品中的應用。

10.如權利要求1所述的人工表皮片或如權利要求8所述的人工表皮片在篩選用于皮膚疾病或狀況的藥物或化妝品中的應用。