[發(fā)明專利]一種間接阻抗法快速檢測酸性罐頭食品商業(yè)無菌的方法

有效

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• 申請日: 2016-11-18
• 公開（公告）號: CN106706717B
• 公開（公告）日: 2020-02-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 杜寒春;葉開富;劉紹剛;譚學(xué)才;鄧衛(wèi)利;劉永強;陳桂鸞;葉蓯佑
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)分析測試研究中心
• 主分類號: G01N27/12
• 分類號: G01N27/12
• 代理公司: 45114 廣西南寧匯博專利代理有限公司
• 代理人: 鄒超賢

1.一種間接阻抗法快速檢測酸性罐頭食品商業(yè)無菌的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1：制備實驗菌液；

步驟2：開啟酸性罐頭食品并制備樣品液；

步驟3：間接阻抗法的臨界值的確定；

步驟4：取被測酸性罐頭食品，按步驟2的方法制備成被測樣品液；在聚苯乙烯測量瓶中加入1mL新鮮制備的0.2%KOH溶液，取被測樣品液接種至裝有酸性肉湯培養(yǎng)基的內(nèi)瓶中，另取等量被測樣品液接種至裝有麥芽浸膏湯培養(yǎng)基的內(nèi)瓶中，內(nèi)瓶完全開放，立即旋緊測量瓶，于15min內(nèi)將其放入BacTrac4300培養(yǎng)箱中；輸入培養(yǎng)溫度、測量間隔時間、測量持續(xù)時間、預(yù)熱時間、臨界值的測量參數(shù)后進行檢測；

步驟5：在開啟的被測酸性罐頭食品中，以無菌操作取出純液體不少于30mL，含有固體不少于30g的被測酸性罐頭食品內(nèi)容物放至滅菌容器內(nèi)留樣，保存在2～5℃冰箱中，待該被測酸性罐頭食品得出檢驗結(jié)論后可棄去；

步驟6：按國家標準GB 4789.26-2013對開啟的被測酸性罐頭食品內(nèi)容物進行感官檢查，pH測定，再對留樣內(nèi)容物和內(nèi)瓶的培養(yǎng)液進行涂片染色鏡檢；

步驟7：當BacTrac4300檢測結(jié)束后，儀器測量結(jié)果為無IDT值時，表明被測酸性罐頭食品中無微生物增殖，經(jīng)感官檢查、pH測定、涂片染色鏡檢確證無微生物增殖現(xiàn)象時，可報告該被測酸性罐頭食品為商業(yè)無菌；當BacTrac4300檢測結(jié)束后，儀器測量結(jié)果IDT＞0時，表明被測酸性罐頭食品中有微生物增殖，經(jīng)感官檢查、pH測定、涂片染色鏡檢確證有微生物增殖現(xiàn)象時，可報告該被測酸性罐頭食品為非商業(yè)無菌；

步驟1所述制備實驗菌液的方法為：取實驗菌株多粘芽孢桿菌、腸膜明串珠菌和異常漢遜酵母，將多粘芽孢桿菌和腸膜明串珠菌分別接種至酸性肉湯培養(yǎng)基，異常漢遜酵母接種至麥芽浸膏湯培養(yǎng)基，36℃培養(yǎng)72h，然后將各培養(yǎng)物用無菌生理鹽水進行10倍稀釋即得實驗菌液；

步驟2所述制備樣品液的方法為：液體酸性罐頭食品搖勻后可直接作為樣品液使用，固體酸性罐頭食品則稱取25g加至225mL滅菌林格氏溶液或蛋白胨緩沖液中進行均質(zhì)，兩者皆有時則各取12.5g加至225mL滅菌林格氏溶液或蛋白胨緩沖液中進行均質(zhì)混勻得到樣品液；

步驟3所述間接阻抗法的臨界值的確定方法為：在聚苯乙烯測量瓶中加入1mL新鮮制備的0.2%KOH溶液，各取1mL實驗菌液分別接種至裝有5mL相應(yīng)培養(yǎng)基的內(nèi)瓶中，內(nèi)瓶完全開放，立即旋緊測量瓶，于15min內(nèi)將其放入BacTrac4300培養(yǎng)箱中進行檢測；各測量參數(shù)預(yù)設(shè)置為：培養(yǎng)溫度：36℃，測量間隔時間：10min，測量持續(xù)時間：72h，預(yù)熱時間：1h，臨界值：-25%M；得到實驗菌液檢測曲線；另選取市場常見的黃桃罐頭、桔子罐頭、梨罐頭、山楂罐頭、什錦水果罐頭、水黃桃罐頭、草莓罐頭、菠蘿罐頭、芒果汁、葡萄罐頭、黑莓罐頭、杏罐頭、楊梅罐頭、柑橘罐頭、蜜桔罐頭的同類酸性罐頭食品滅菌后，按步驟2的方法制備得到樣品液，在聚苯乙烯測量瓶中加入1mL新鮮制備的0.2%KOH溶液，取1mL樣品液接種至裝有5mL酸性肉湯培養(yǎng)基的內(nèi)瓶中，另取1mL樣品液接種至裝有5mL麥芽浸膏湯培養(yǎng)基的內(nèi)瓶中，在相同條件下同時進行試驗，得到陰性樣品產(chǎn)生的基線最大漂移值，確定間接阻抗法的臨界值；

步驟4所述各測量參數(shù)設(shè)置為：培養(yǎng)溫度：36℃，測量間隔時間：10min，測量持續(xù)時間：72h，預(yù)熱時間：1h，評價類型：M2；臨界值：步驟3得到的臨界值；

步驟4所述被測樣品液、酸性肉湯培養(yǎng)基和麥芽浸膏湯培養(yǎng)基的加樣量均為3mL。

2.一種間接阻抗法快速檢測酸性罐頭食品商業(yè)無菌的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1：制備實驗菌液；

取實驗菌株多粘芽孢桿菌、腸膜明串珠菌和異常漢遜酵母，將多粘芽孢桿菌和腸膜明串珠菌分別接種至酸性肉湯培養(yǎng)基，異常漢遜酵母接種至麥芽浸膏湯培養(yǎng)基，36℃培養(yǎng)72h，然后將各培養(yǎng)物用無菌生理鹽水進行10倍稀釋即得實驗菌液；

步驟2：開啟酸性罐頭食品并制備樣品液；

去除酸性罐頭食品表面標簽，在包裝容器表面用防水的油性記號筆做好標記，并記錄容器、編號、產(chǎn)品性狀、泄漏情況、是否有小孔或銹蝕、壓痕、膨脹的異常情況；稱量酸性罐頭食品并記錄；用冷水和洗滌劑清洗待檢酸性罐頭食品的光滑面；水沖洗后用無菌毛巾擦干；以含4%碘的乙醇溶液浸泡消毒光滑面15min后用無菌毛巾擦干，在密閉罩內(nèi)點燃至表面殘余的碘乙醇溶液全部燃燒完；采用易燃包裝材料包裝的酸性罐頭食品不能灼燒，以含4%碘的乙醇溶液浸泡消毒光滑面30min后用無菌毛巾擦干；在超凈工作臺或百級潔凈實驗室中開啟；帶湯汁的酸性罐頭食品開啟前應(yīng)適當振搖；使用無菌開罐器在消毒后的罐頭光滑面開啟一個適當大小的口，開罐時不得傷及卷邊結(jié)構(gòu)，每一個罐頭單獨使用一個開罐器，不得交叉使用；如酸性罐頭食品為軟包裝，可以使用滅菌剪刀開啟，不得損壞接口處；立即在開口上方嗅聞氣味，并記錄；

液體酸性罐頭食品搖勻后可直接作為樣品液使用，固體酸性罐頭食品則稱取25g加至225mL滅菌林格氏溶液或蛋白胨緩沖液中進行均質(zhì)，兩者皆有時則各取12.5g加至225mL滅菌林格氏溶液或蛋白胨緩沖液中進行均質(zhì)混勻得到樣品液；

步驟3：間接阻抗法的臨界值的確定；

在聚苯乙烯測量瓶中加入1mL新鮮制備的0.2%KOH溶液，各取1mL實驗菌液分別接種至裝有5mL相應(yīng)培養(yǎng)基的內(nèi)瓶中，內(nèi)瓶完全開放，立即旋緊測量瓶，于15min內(nèi)將其放入BacTrac4300培養(yǎng)箱中進行檢測；各測量參數(shù)預(yù)設(shè)置為：培養(yǎng)溫度：36℃，測量間隔時間：10min，測量持續(xù)時間：72h，預(yù)熱時間：1h，臨界值：-25%M；得到實驗菌液檢測曲線；另選取市場常見的黃桃罐頭、桔子罐頭、梨罐頭、山楂罐頭、什錦水果罐頭、水黃桃罐頭、草莓罐頭、菠蘿罐頭、芒果汁、葡萄罐頭、黑莓罐頭、杏罐頭、楊梅罐頭、柑橘罐頭、蜜桔罐頭的同類酸性罐頭食品滅菌后，按步驟2的方法制備得到樣品液，在聚苯乙烯測量瓶中加入1mL新鮮制備的0.2%KOH溶液，取1mL樣品液接種至裝有5mL酸性肉湯培養(yǎng)基的內(nèi)瓶中，另取1mL樣品液接種至裝有5mL麥芽浸膏湯培養(yǎng)基的內(nèi)瓶中，在相同條件下同時進行試驗，得到陰性樣品產(chǎn)生的基線最大漂移值，確定間接阻抗法的臨界值為-45%M；

步驟4：取黃桃罐頭，按步驟2的方法制備成被測樣品液；在聚苯乙烯測量瓶中加入1mL新鮮制備的0.2%KOH溶液，取3mL被測樣品液接種至裝有3mL酸性肉湯培養(yǎng)基的內(nèi)瓶中，另取等量被測樣品液接種至裝有3mL麥芽浸膏湯培養(yǎng)基的內(nèi)瓶中，內(nèi)瓶完全開放，立即旋緊測量瓶，于15min內(nèi)將其放入BacTrac4300培養(yǎng)箱中；輸入各測量參數(shù)：培養(yǎng)溫度：36℃，測量間隔時間：10min，測量持續(xù)時間：72h，預(yù)熱時間：1h，評價類型：M2；臨界值：-45%M，進行檢測；

步驟5：在開啟的黃桃罐頭中，以無菌操作取出30g黃桃罐頭內(nèi)容物放至滅菌容器內(nèi)留樣，保存在2℃冰箱中，待該黃桃罐頭得出檢驗結(jié)論后可棄去；

步驟6：按國家標準GB 4789.26-2013對開啟的黃桃罐頭內(nèi)容物進行感官檢查, pH測定，再對留樣內(nèi)容物和內(nèi)瓶的培養(yǎng)液進行涂片染色鏡檢；

步驟7：當BacTrac4300檢測結(jié)束后，儀器測量結(jié)果為無IDT值時，表明黃桃罐頭中無微生物增殖，經(jīng)感官檢查、pH測定、涂片染色鏡檢確證無微生物增殖現(xiàn)象時，可報告該黃桃罐頭為商業(yè)無菌；當BacTrac4300檢測結(jié)束后，儀器測量結(jié)果IDT＞0時，表明黃桃罐頭中有微生物增殖，經(jīng)感官檢查、pH測定、涂片染色鏡檢確證有微生物增殖現(xiàn)象時，可報告該黃桃罐頭為非商業(yè)無菌。