[發明專利]面積歸一化法測定西紅花藥材中西紅花苷類成分的方法

有效

• 申請號: 201611023150.X
• 申請日: 2016-11-21
• 公開（公告）號: CN106706774B
• 公開（公告）日: 2019-05-28
• 發明（設計）人: 錢曉東;周桂芬;姚沖;袁玉梅;李麗琴;余靜芬
• 申請（專利權）人: 湖州市中心醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京律遠專利代理事務所(普通合伙) 11574
• 代理人: 全成哲

本發明公開了一種面積歸一化法測定西紅花藥材中西紅花苷類成分的方法，建立了西紅花藥材質量控制方法，分離出12個主要的西紅花苷類成分，以相對穩定、價廉的西紅花苷?Ⅰ為內參物，采用面積歸一化法對西紅花藥材中西紅花總苷進行含量測定，解決HPLC法測定西紅花藥材時多個西紅花苷類成分的分離以及含量測定時多個西紅花苷對照品不易獲得的問題。以西紅花苷?Ⅰ為內參物，建立了西紅花苷?Ⅰ對西紅花苷?Ⅱ的相對校正因子，利用相對校正因子計算西紅花苷?Ⅱ的含量；并與藥典采用的外標法測定的32批西紅花中西紅花苷?Ⅰ和Ⅱ含量進行比較，以驗證一測多評法的可行性。解決了藥典測定方法中西紅花苷?Ⅱ對照品性質不穩定、價格昂貴的問題。

技術領域

本發明涉及中藥活性成分分析技術領域，具體地說，是涉及一測多評法與面積歸一化法相結合的測定西紅花藥材中西紅花苷類成分的方法。

背景技術

西紅花(Crocus sativus L.)又稱藏紅花，僅以雌蕊上部三根紅色柱頭入藥，人工采摘100000-150000朵花才能獲得一公斤藏紅花干品，因此價格昂貴，為名貴中藥材，具有活血化瘀、涼血解毒、解郁安神之功效。主要有效成分為西紅花苷(crocins)，是一種紅色的水溶性胡蘿卜素類化合物，是西紅花酸與葡萄糖或龍膽二糖結合而成的一系列酯苷類，目前已分離得到苷元均為西紅花酸的16種不同順反異構體的西紅花苷。世界各地不同來源西紅花中均以西紅花苷-Ⅰ含量最高，其次為西紅花苷-Ⅱ，西紅花苷產地栽培、干燥與儲存等對西紅花苷含量影響很大，因此在西紅花生產加工和質量控制方面均需要適當的藏紅花苷含量測定方法，《中國藥典》2015年版以西紅花苷中的西紅花苷-Ⅰ和苷-Ⅱ為指標對西紅花質量控制，要求兩者總含量不低于10％，但西紅花苷-Ⅰ和苷-Ⅱ在某些樣品中只占各西紅花總苷的70％左右，且隨著儲存時間的增加，反式的西紅花-Ⅰ和苷-Ⅱ會發生降解或異構化，部分轉為其他順式異構體，而西紅花苷口服給藥后，所有西紅花苷均會水解為苷元西紅花酸被吸收入血起效，因此西紅花總苷含量的高低對藥效的影響更大，《中國藥典》根據西紅花苷-Ⅰ和苷-Ⅱ的總含量為標準，不能全面反映西紅花藥材質量；西紅花在國際上主要用作色素和香料，作為食品添加劑的國際標準ISO3632-2(2010版)，用分光光度法于λmax 440nm測定西紅花水提取液的色價來進行質量控制與分級，規定西紅花苷色價大于190為一級品，該方法更不能精確定量西紅花苷含量。因此，《中國藥典》及國際標準ISO 3632-2對藏紅花質量評價的標準均需進一步完善，需要建立適合生產加工和質量控制的西紅花總苷含量測定方法。

一般認為分光光度法特征性不強，但西紅花是一味很特殊的藥材，藥效成分均集中于柱頭，含量高且相對簡單，主要只有藏紅花苷、藏花醛和苦藏花素三類成分，在可見光區440nm處只有西紅花苷類有吸收，其他成分無干擾，用可見分光光度法(440nm)測定總西紅花苷含量的方法，方法簡便，易于推廣，但該方法只適合生產加工者使用，若有人為摻假等行為，則不適合使用。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對《中國藥典》僅測定西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ含量，不能全面體現總西紅花苷的真實含量，《國際標準》測定的總西紅花苷色價不能量化總西紅花苷的含量的缺點。本發明將一測多評測定的兩種西紅花苷含量和面積歸一化法測定的總西紅花苷含量相結合，實現了一個對照品完成各西紅花苷類成分的含量測定，降低了檢測成本，并能全面評價西紅花的質量，為西紅花藥材質量評價方法的完善提供了更好的技術參考。

本發明采用高效液相法，通過優選色譜條件，波長切換等技術測定藥材中的西紅花苷，可分離大部分西紅花苷類成分，但西紅花苷的苷元由七個共軛雙鍵組成，易氧化不穩定，因此西紅花苷對照品價格昂貴，精確定量所有西紅花苷類成分含量，檢測成本非常昂貴，本發明使用采用面積歸一化法(ANM)對西紅花藥材中西紅花總苷進行含量測定，解決了HPLC法含量測定時多個西紅花苷對照品不易獲得的問題。