[發明專利]面積歸一化法測定西紅花藥材中西紅花苷類成分的方法

有效

• 申請號: 201611023150.X
• 申請日: 2016-11-21
• 公開（公告）號: CN106706774B
• 公開（公告）日: 2019-05-28
• 發明（設計）人: 錢曉東;周桂芬;姚沖;袁玉梅;李麗琴;余靜芬
• 申請（專利權）人: 湖州市中心醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京律遠專利代理事務所(普通合伙) 11574
• 代理人: 全成哲

1.一種面積歸一化法測定西紅花藥材中西紅花苷類成分的方法，其特征在于，包括步驟：

a.確定色譜條件，色譜條件為UltimateXBC18色譜柱，色譜柱為250mm×4.6mm,5μm；柱溫：30℃；流動相：水-甲醇，梯度洗脫，0-60min，甲醇：20％-100％；DAD檢測器波長范圍200-600nm，檢測波長440nm，流速：1.0mL·min-1；進樣量：10μL；

b.制備對照品溶液：

混合對照品溶液：精密稱取西紅花苷-Ⅰ對照品和西紅花苷-Ⅱ對照品，置于棕色量瓶中，用稀乙醇溶解并定容至刻度，得混合對照品溶液，搖勻，備用；

西紅花苷-Ⅰ對照品溶液：精密稱取西紅花苷-Ⅰ對照品置棕色量瓶中，用稀乙醇溶解并定容至刻度，得西紅花苷-Ⅰ對照品溶液；

c.制備供試品溶液：參照中國藥典2015年版西紅花項下，稱取西紅花樣品粉末約10mg，精密稱定，置50mL棕色量瓶中，加稀乙醇40mL，冰浴超聲：250W、40KHz處理20min，放置室溫，加乙醇定容至刻度，搖勻，0.22μm微孔濾膜濾過，取續濾液，得供試品溶液；

d.根據2015年版中國藥典的外標法定量西紅花苷-Ⅰ和苷-Ⅱ的含量；

e.一測多評法QMSA測定西紅花苷-Ⅰ和苷-Ⅱ的含量；

f.紫外分光光度法測定總西紅花苷的含量；

g.面積歸一化法測定總西紅花苷的含量，精密吸取供試品溶液及步驟b中對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀測定，測定時間為不少于60分鐘，同時進行質譜分析，質譜條件為：離子源：大氣壓電噴霧離子源；檢測模式：正負離子；全掃描質核比：50-1200 m/z；干燥氣溫度：350℃，干燥氣流量：12.0L·min-1，霧化氣壓力：35.0psi；毛細管電壓：4.5kV；碰撞電壓1.0V；進入質譜的流動相流速分流至0.4mL·min-1，以西紅花苷-Ⅰ為對照，按C總苷＝(C苷-Ⅰ×A總苷)/A苷-Ⅰ計算總西紅花苷的含量，

其中A苷-Ⅰ為樣品中西紅花苷-Ⅰ色譜峰峰面積；A總苷為西紅花樣品440nm下12個西紅花苷類色譜峰峰面積之和；C苷-Ⅰ為外標法測定的西紅花樣品中西紅花苷-Ⅰ的質量濃度；C總苷為西紅花樣品中總西紅花苷質量濃度。

2.如權利要求1所述的面積歸一化法測定西紅花藥材中西紅花苷類成分的方法，其特征在于，所述步驟d，進一步為，取步驟b中西紅花苷-Ⅰ和苷-Ⅱ的混合對照品溶液1、2、4、8、10、20μL，按步驟a中色譜條件進樣分析，測定峰面積，分別以西紅花苷-Ⅰ和苷-Ⅱ質量濃度對其相應峰面積進行線性回歸，得回歸方程，精密量取步驟c中的供試品溶液10μL，注入液相色譜儀測定，相應峰面積代入回歸方程計算苷-Ⅰ和苷-Ⅱ含量。

3.如權利要求1所述的面積歸一化法測定西紅花藥材中西紅花苷類成分的方法，其特征在于，所述步驟e，進一步為，取步驟b中混合對照品溶液，分別進樣1、2、4、8、10、15、20μL，記錄峰面積，應用多點校正法，以西紅花苷-Ⅰ為內參物，計算西紅花苷-Ⅰ對西紅花苷-Ⅱ的相對校正因子fk/s，fk/s計算公式：fk/s＝(Cs×Ak)/(Ck×As)，待測成分西紅花苷-Ⅱ質量濃度計算公式：Ck′＝(Cs×Ak′)/(fk/s×As)，

其中Cs為內參物西紅花苷-Ⅰ質量濃度，As為內參物色譜峰峰面積，Ck為西紅花苷-Ⅱ對照品質量濃度，Ak為西紅花苷-Ⅱ對照品色譜峰峰面積，Ck′為西紅花樣品中西紅花苷-Ⅱ質量濃度，Ak′為西紅花樣品中西紅花苷-Ⅱ色譜峰峰面積。

4.如權利要求1所述的面積歸一化法測定西紅花藥材中西紅花苷類成分的方法，其特征在于，所述步驟f，進一步為，精密吸取西紅花苷-Ⅰ對照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL置于10mL量瓶中，用稀乙醇稀釋至刻度，以稀乙醇作空白對照，采用紫外-可見分光光度法，于440nm波長處測定吸光度，得標準曲線；精密吸取步驟c中的供試品溶液5mL，置50mL棕色量瓶中，用稀乙醇稀釋至刻度，用可見分光光度法于440nm波長處測定吸光度，以西紅花苷-Ⅰ為對照標準品，按標準曲線計算總西紅花苷含量。