[發(fā)明專利]一種植物樣品中三類不同化學性質的內源性植物激素的前處理方法及定量檢測方法

在審

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• 申請日: 2016-11-16
• 公開（公告）號: CN107543746A
• 公開（公告）日: 2018-01-05
• 發(fā)明（設計）人: 馮鈺锜;蔡保東;羅曉彤
• 申請（專利權）人: 武漢綠劍可瑞信科技有限公司
• 主分類號: G01N1/34
• 分類號: G01N1/34;G01N1/40;G01N30/02
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司42102
• 代理人: 張秋燕

技術領域

本發(fā)明涉及一種植物樣品中三類不同化學性質內源性植物激素的前處理方法及定量檢測方法，屬于分析化學領域。

背景技術

植物激素在植物生長、發(fā)育的各個階段發(fā)揮著極其重要的作用。同時、準確的定量植物組織中多種植物激素，有助于了解植物激素的生理功能和調控網(wǎng)絡。但是，由于植物提取液中基質復雜、含量極低且化學性質各異，使得同時測定植物樣品中多種植物激素具有較大困難。

目前已報道的植物中多種植物激素的前處理方法所針對的分析物大多為酸性植物激素、堿性植物激素中的一種或者幾種。現(xiàn)有專利ZL 2012 1 0486507.3和ZL 2013 1 0131422.8是專門針對油菜素甾醇(BRs)的分析檢測。由于BRs類激素化學結構性質相似，且都含有順式羥基，針對這一類物質的性質，有了上述專利所述的前處理方案。但是對于化學性質不同于油菜素甾醇(BRs)的其他類植物激素，用上述方案則無法實現(xiàn)。目前，同時分析酸性植物激素、堿性植物激素和油菜素甾醇仍然十分困難。

發(fā)明內容

本發(fā)明所要解決的技術問題是針對上述現(xiàn)有技術存在的不足而提供一種植物樣品中三類不同化學性質的內源性植物激素的前處理方法及定量檢測方法，可同時實現(xiàn)低含量的三類不同化學性質的內源性植物激素的富集純化，并實現(xiàn)同時定量檢測，方法簡單快速，準確性高。

本發(fā)明為解決上述提出的問題所采用的技術方案為：

一種植物樣品中三類不同化學性質的內源性植物激素的前處理方法，主要步驟如下：

1)在植物樣品中定量加入多種內源性植物激素的同位素內標，然后以溶劑提取得到樣品溶液；

2)以二氧化鈦(TiO₂)材料和硼親和磁性納米顆粒材料為凈化介質對步驟1)所得樣品溶液進行除雜，進而得到植物樣品中三類不同化學性質的內源性植物激素的待測溶液，從而實現(xiàn)植物樣品中多種內源性植物激素的樣品前處理。

優(yōu)選地，所述步驟2)為：以二氧化鈦(TiO₂)材料富集三類不同化學性質的內源性植物激素，之后加入含有硼親和材料在溶液中對油菜素甾醇(即中性植物激素)進行萃取，所得萃取過后的溶液即為植物樣品中酸性和堿性內源性植物激素的待測溶液；對吸附在硼親和材料上的油菜素甾醇進行解吸，所得解吸液即為植物樣品中內源性油菜素甾醇的待測溶液，從而實現(xiàn)植物樣品中三類不同化學性質的內源性植物激素的樣品前處理。

進一步優(yōu)選地，所述步驟2)為：(a)除去步驟1)所得樣品溶液中的溶劑，得到樣品渣；然后所得樣品渣加入溶劑B復溶，得到復溶后的樣品溶液；(b)將所得復溶后的樣品溶液中加入TiO₂材料進行富集三類不同化學性質的內源性植物激素，棄去溶液，得到富集有三類不同化學性質的內源性植物激素的TiO₂材料；(c)將步驟(b)所得TiO₂材料分散于溶劑C中，加入硼親和材料對油菜素甾醇進行萃取，所得萃取過后的溶液即為植物樣品中酸性和堿性內源性植物激素的待測溶液；(d)將吸附有油菜素甾醇硼親和材料溶于解吸液D中，對油菜素甾醇進行解吸，所得解吸液即為植物樣品中內源性油菜素甾醇的待測溶液。

其中，溶劑B為可以溶解樣品渣，且分析物在TiO₂材料富集過程中有較好的回收率，例如乙腈等。所述溶劑C能破壞親水作用和配位作用，例如甲醇、乙腈及其與水的混合溶液；步驟(c)中進行對油菜素甾醇萃取同時，可以解吸酸性和堿性內源性植物激素同時進行，也可以分開進行，若同時進行時，則溶劑C為甲醇、乙腈及其與水的混合溶液，需加入少量氨水，調節(jié)pH至8.5-10；溶液D為可以破壞硼親和作用的溶劑，釋放被捕獲的含有順式羥基的油菜素甾醇，例如本發(fā)明所使用的含有雙氧水的乙腈溶液等等。

按上述方案，所述植物樣品為油菜花、擬南芥等等含有內源性植物激素的植物樣品。

按上述方案，所述植物樣品為粉末狀，如可以預先采用液氮冷凍后研磨至粉末狀。

按上述方案，所述三類不同化學性質的內源性植物激素主要包括含有羧基的酸性植物激素(包括生長素類、赤霉素類、茉莉酸類和脫落酸類等)，以堿基腺嘌呤為骨架結構的堿性植物激素(例如細胞分裂素類)以及在酸堿中不易電離的中性植物激素(即油菜素甾醇)中的一種或多種。