[發明專利]一種植物樣品中三類不同化學性質的內源性植物激素的前處理方法及定量檢測方法

在審

• 申請號: 201611022062.8
• 申請日: 2016-11-16
• 公開（公告）號: CN107543746A
• 公開（公告）日: 2018-01-05
• 發明（設計）人: 馮鈺锜;蔡保東;羅曉彤
• 申請（專利權）人: 武漢綠劍可瑞信科技有限公司
• 主分類號: G01N1/34
• 分類號: G01N1/34;G01N1/40;G01N30/02
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司42102
• 代理人: 張秋燕

1.一種植物樣品中三類不同化學性質的內源性植物激素的前處理方法，其特征在于主要步驟如下：

1)在植物樣品中定量加入多種內源性植物激素的同位素內標，然后以溶劑提取得到樣品溶液；

2)以二氧化鈦材料和硼親和磁性納米顆粒材料為凈化介質對步驟1)所得樣品溶液進行除雜，進而得到植物樣品中三類不同化學性質的內源性植物激素的待測溶液，從而實現植物樣品中多種內源性植物激素的樣品前處理。

2.根據權利要求1所述的一種植物樣品中三類不同化學性質的內源性植物激素的前處理方法，其特征在于所述步驟2)具體為：以二氧化鈦材料富集三類不同化學性質的內源性植物激素，之后加入含有硼親和材料在溶液中對油菜素甾醇進行萃取，所得萃取過后的溶液即為植物樣品中酸性和堿性內源性植物激素的待測溶液；對吸附在硼親和材料上的油菜素甾醇進行解吸，所得解吸液即為植物樣品中內源性油菜素甾醇的待測溶液，從而實現植物樣品中三類不同化學性質的內源性植物激素的樣品前處理。

3.根據權利要求1所述的一種植物樣品中三類不同化學性質的內源性植物激素的前處理方法，其特征在于所述植物樣品為油菜花、擬南芥樣品。

4.根據權利要求1所述的一種植物樣品中三類不同化學性質的內源性植物激素的前處理方法，其特征在于所述植物樣品為粉末狀。

5.根據權利要求1所述的一種植物樣品中三類不同化學性質的內源性植物激素的前處理方法，其特征在于所述三類不同化學性質的內源性植物激素主要包括含有羧基的酸性植物激素，以堿基腺嘌呤為骨架結構的堿性植物激素，以及在酸堿中不易電離的中性植物激素中的一種或多種。

6.根據權利要求1所述的一種植物樣品中三類不同化學性質的內源性植物激素的前處理方法，其特征在于所述含有羧基的酸性植物激素包括生長素類、赤霉素類、茉莉酸類和脫落酸類植物激素；以堿基腺嘌呤為骨架結構的堿性植物激素主要包括細胞分裂素類植物激素，中性植物激素主要為含有順式羥基的油菜素甾醇類植物激素。

7.根據權利要求1所述的一種植物樣品中三類不同化學性質的內源性植物激素的前處理方法，其特征在于步驟1)中所述溶劑為甲醇、乙腈、異丙醇、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷、乙醚、丙酮或甲酸等中的一種或幾種按任意比例的混合物；溶劑提取的溫度為-25～-15℃，時間范圍為6～12h。

8.根據權利要求1或2所述的一種植物樣品中三類不同化學性質的內源性植物激素的前處理方法，其特征在于所述加入TiO₂材料后富集的溫度為室溫，時間為1min或者大于1min；所述加入硼親和材料后萃取的溫度為室溫，時間為5min或者大于5min。萃取過程中可以采用渦旋或者振蕩等方式以保證萃取均勻充分。

9.一種植物樣品中三種不同化學性質的內源性植物激素的定量檢測方法，其特征在于主要步驟如下：

1)在植物樣品中定量加入多種內源性植物激素的同位素內標，然后以溶劑提取得到樣品溶液；

2)以二氧化鈦材料和硼親和磁性納米顆粒材料為凈化介質對步驟1)所得樣品溶液進行除雜，進而得到植物樣品中三類不同化學性質的內源性植物激素的待測溶液，從而實現植物樣品中多種內源性植物激素的樣品前處理；

3)將前處理方法所得植物樣品中三種不同化學性質的內源性植物激素的待測溶液通過分析儀器采集響應信號或者數據，進而采用內標法同時定量測定植物樣品中的三種不同化學性質的內源性植物激素。

10.一種植物樣品中多種內源性植物激素的定量檢測方法，其特征在于主要步驟如下：

1)在植物樣品中定量加入多種內源性植物激素的同位素內標，然后以溶劑提取得到樣品溶液；

2)以TiO₂料為和硼親和材料作為凈化介質對步驟2)所得樣品溶液進行純化，進而得到植物樣品中多種內源性植物激素的待測溶液；

3)配置不同濃度梯度的含有多種內源性植物激素標準樣品的溶液，并定量加入多種內源性植物激素的同位素內標，然后對所配置好的標準樣品溶液進行超高效液相色譜-串聯質譜分析得到色譜圖，然后將每種內源性植物激素的色譜圖峰面積積分，除以與之相應的內標的峰面積，對相應內源性植物激素的濃度作線性回歸，制得標準曲線；

4)將所得植物樣品中多種內源性植物激素的待測溶液通過超高效液相色譜-串聯質譜分析采集色譜圖；進而將色譜圖中每種內源性植物激素的峰面積積分，除以與之相應的內標的峰面積，采用步驟3)所得標準曲線同時定量測定植物樣品中的三種不同化學性質的內源性植物激素。