[發明專利]一種磷酸化肽富集材料及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201611019827.2
• 申請日: 2016-11-18
• 公開（公告）號: CN106749884B
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 孫濤壘;梁鑫淼;卿光焱;李秀玲;陸琦;姜舸
• 申請（專利權）人: 武漢理工大學;中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C08F220/54
• 分類號: C08F220/54;C08F220/60;C07K1/22
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 鄔麗明

1.一種雙組分共聚物，其特征在于，所述雙組份共聚物具有如下所示的分子結構：

其中R為羧基、硝基、甲基、甲酸乙酯基；X＝0.01-0.5。

2.一種磷酸化肽富集材料，其特征在于，包括基底及形成于基底表面的雙組分共聚物層，所述雙組分共聚物的分子結構如權利要求1所述，所述雙組分共聚物層的厚度為10-80nm。

3.如權利要求2所述的磷酸化肽富集材料，其特征在于，所述基底的材料為Si、Cu、Ag、Au、Pt、CuO、Fe₃O₄、多孔SiO₂、多孔Al₂O₃、多孔TiO₂或多孔ZrO₂中的任意一種或者兩種以上任意比例的混合。

4.如權利要求2或3所述的磷酸化肽富集材料的制備方法，其特征在于，該制備方法是利用表面引發-原子轉移自由基聚合反應機制，將雙組分共聚物接枝到基底表面，具體制備方法如下：

1)在反應容器中依次加入異丙基丙烯酰胺和硫脲功能單體，同時加入超純水及二甲基甲酰胺的混合溶液作溶劑，其中，異丙基丙烯酰胺和硫脲功能單體的摩爾比1-20:1，超純水與二甲基甲酰胺的體積比為1:1-10；

2)在無氧條件下加入催化劑和配體，將基底浸入前述溶液中，保持氮氣氣氛，在恒溫60-80℃條件下進行原子轉移自由基聚合反應4-24小時；

3)反應結束后，洗滌基底表面并在30-80℃下真空干燥，得到所述磷酸化肽富集材料。

5.如權利要求2或3所述的磷酸化肽富集材料在磷酸化肽富集分離中的應用方法，其特征在于，采用柱固相萃取模式，具體步驟如下：

1)將磷酸化肽富集材料裝入移液槍槍頭或者凝膠上樣吸頭中，形成微固相萃取柱，采用活化液和平衡液活化及平衡微固相萃取柱，將蛋白酶解物溶解于平衡液中，并上到微固相萃取柱上，磷酸化肽富集材料與蛋白酶解物的質量比為100:1-1000:1；

2)采用5-200倍柱體積pH 0-7的有機溶液沖洗萃取柱；

3)采用5-100倍柱體積pH 3-7的有機溶液洗脫得單磷酸化肽；

4)采用5-100倍柱體積pH 0-3的有機溶液洗脫得多磷酸化肽，上述整個過程在10-60℃進行。

6.如權利要求2或3所述的磷酸化肽富集材料在磷酸化肽富集分離中的應用方法，其特征在于，采用分散固相萃取模式，具體步驟如下：

1)先采用活化液活化磷酸化肽富集材料，將該磷酸化肽富集材料與蛋白酶解物以質量比為100:1-1000:1混合，孵化0.5分鐘-12小時，過濾或者分散固相萃取分離，棄上層清液，收集沉淀；

2)采用pH＝0-7的有機溶液對沉淀清洗；

3)將清洗后的沉淀采用pH 3-7有機溶液洗滌，過濾或者分散固相萃取分離，收集上層清液；濃縮得到單磷酸化肽；

4)將清洗后的沉淀采用體積pH 0-3有機溶液洗滌，過濾或者分散固相萃取分離，收集上層清液，得多磷酸化肽，上述整個過程在10-60℃進行。

7.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述有機溶液、活化液和平衡液均為有機溶劑、有機酸和水的混合液，有機溶劑為乙腈、甲醇或乙醇，有機酸為甲酸、乙酸或三氟乙酸，有機溶劑的體積濃度為10％-95％，有機酸的體積濃度為0.1-5％。

8.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述有機溶液、活化液和平衡液均為有機溶劑、有機酸和水的混合液，有機溶劑為乙腈、甲醇或乙醇，有機酸為甲酸、乙酸或三氟乙酸，有機溶劑的體積濃度為10％-95％，有機酸的體積濃度為0.1-5％。

9.如權利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述活化液中有機溶劑體積濃度為10-50％，pH＝0-7。

10.如權利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述平衡液中有機溶劑體積濃度為50-95％，pH＝0-7。