[發(fā)明專利]一種胰島素抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611018769.1
• 申請日: 2016-11-21
• 公開（公告）號: CN106596524A
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 祝亮;宋永波;張昭;王剛;王棟凱
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/68;G01N33/532
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及體外診斷免疫檢測領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明提供了一種胰島素抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術(shù)

胰島素自身抗體（Insulin autoantibodies，IAA）是胰島素依賴型糖尿病 （Insulin-dependent diabetes mellitus，IDDM）或稱1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus，T1DM）個體的一種特異性免疫學(xué)標(biāo)志物，IDDM是由于胰腺中的β細(xì)胞遭到免疫破壞，最終導(dǎo)致胰島素分泌不足引起的。在有患IDDM基因傾向的個體中，對β細(xì)胞的免疫性破壞發(fā)生于一個無癥狀的時期，這個時期被稱為糖尿病前期，在IDDM的臨床診斷之前，糖尿病前期就已經(jīng)存在多年，在這個時期，人體血清中可檢測出胰島素自身抗體和胰島素細(xì)胞抗體。因此，檢測胰島素自身抗體對于IDDM的早期診斷具有重要的臨床意義。

IAA是唯一僅識別β細(xì)胞特異性抗原的抗體，對于預(yù)測1型糖尿病的發(fā)生有較高的價值。然而，IAA尚可存在于病毒感染、藥物反應(yīng)、多內(nèi)分泌腺病或其他自身免疫性疾病患者中。

臨床檢測胰島素抗體的常見方法有放射性免疫法、酶聯(lián)免疫吸附法，但這些方法都存在著一些不足之處。

一、放射性免疫法

該方法的基本原理是先用放射性的I¹²⁵ 標(biāo)記重組IAA抗原，血清中的特異性抗體先與抗原結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，加入二抗后孵育形成抗原-抗體-二抗復(fù)合物，離心后檢測放射性強(qiáng)弱從而判斷血清中特異性抗體的含量。該方法技術(shù)較成熟，但是其不足也很明顯：

（1）放射性對操作者身體有影響；

（2）操做相對較復(fù)雜，需要離心機(jī)和發(fā)射性檢測裝置，很多基層醫(yī)院難以推廣；

（3）本底高，特異性不好；

二、酶聯(lián)免疫吸附法

酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA) 被廣泛應(yīng)用，但該方法也存在著下述的不足之處：

(1) 使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96孔專用微孔板作為抗原包被用具和反應(yīng)容器，在使用時只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，無法進(jìn)行獨(dú)立的、單人份的檢測；

(2) 定量測定所用的試劑種類較多，每一種檢測試劑都要用試劑瓶來盛裝，并且每使用一種試劑時都需要更換吸液嘴來分別加注到微孔板的微孔中，不但試劑瓶種類多，加注試劑的操作也極為繁瑣；

(3) 缺少對檢測信息的相應(yīng)標(biāo)注，只能通過查看試劑盒外包裝盒的標(biāo)識才能了解或知悉檢測試劑的生產(chǎn)批號及有效期信息，而且所知悉的信息在檢測過程中不受控，具有很大的隨意性；

(4) 檢測試劑在檢測過程中處于開放的空間，容易引起各種試劑之間的交叉污染而影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性；

(5) 檢測過程多采用手工操作，試劑或樣本的加量不很精確，操作過程極為繁瑣和復(fù)雜，容易發(fā)生操作差錯，檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度較差。

發(fā)明內(nèi)容

目前胰島素抗體檢測技術(shù)存在以下缺點：檢測成本高、檢測靈敏度低、重現(xiàn)性低、操作復(fù)雜等。

本發(fā)明正是為了克服以上所述缺點，公開了一種檢測成本低、靈敏度高、重現(xiàn)性高、操作簡單的胰島素抗體試劑盒及其制備方法。本發(fā)明首先制備化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒，主要包括：胰島素包被的磁微粒、吖啶酯標(biāo)記的抗人IgG以及胰島素抗體定標(biāo)品；然后利用全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀對定標(biāo)品進(jìn)行檢測，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，內(nèi)置于電腦軟件，測試實際樣本，根據(jù)樣本發(fā)光值計算樣本濃度；最后對胰島素抗體全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)進(jìn)行性能（靈敏度、線性、精密度、干擾性）的評價。

本發(fā)明與目前技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點：

1、本發(fā)明選擇吖啶酯作為標(biāo)記材料，并應(yīng)用于化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)，該發(fā)光體系為直接化學(xué)發(fā)光，與傳統(tǒng)的酶促化學(xué)發(fā)光相比，該反應(yīng)不需要酶的參與，更加節(jié)約成本；

2、本發(fā)明選用的吖啶酯化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)檢測靈敏度高，能夠達(dá)到0.04 U/mL，相比其它的胰島素抗體檢測方法靈敏度至少提高了10倍；

3、本發(fā)明選用的吖啶酯化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)線性范圍寬，能達(dá)到5-300U/mL，其它的胰島素抗體化學(xué)發(fā)檢測方法的檢線性范圍為10-200U/mL；

4、本發(fā)明選用的吖啶酯化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)重復(fù)性高，批內(nèi)及批間差均在5%以內(nèi)，這是其它化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)難以達(dá)到的；

5、本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)已實現(xiàn)樣本的定量，通過內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)曲線到測試軟件，只需測試樣本就可直接得到樣本的濃度值；