[發明專利]一種胰島素抗體化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201611018769.1
• 申請日: 2016-11-21
• 公開（公告）號: CN106596524A
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 祝亮;宋永波;張昭;王剛;王棟凱
• 申請（專利權）人: 深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/68;G01N33/532
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種胰島素抗體化學發光免疫檢測試劑盒，所述試劑盒包括：純化的胰島素包被的磁微粒工作液、吖啶酯標記的抗人IgG吖啶酯標記的純化的胰島素工作液、胰島素抗體定標品、預激發液、激發液。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述胰島素包被的固相載體為磁微粒。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述胰島素包被的固相載體為羧基化的粒徑為0.05-1um磁微粒。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述化學發光標記物為吖啶酯、吖啶酯磺酰胺、吖啶酯甲苯磺酰胺、吖啶酯對甲基磺酰胺、吖啶酯三氟甲基磺酰胺。

5.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述化學發光標記物優選吖啶酯。

6.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述化學發光底物液包括化學發光激發液、化學發光預激發液。

7.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述化學發光預激發液為質量分數0.005% ~ 0.5%的雙氧水(H₂O₂)溶液，激發液為0.005mol/L ~ 0.025mol/L的氫氧化鈉(NaOH)溶液。

8.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述胰島素抗體定標品為用標準品緩沖液將胰島素抗體配制成濃度為5 U/mL、20 U/mL 、40 U/mL、80 U/mL 、150 U/mL 、300 U/mL ，分裝凍干，4 ℃保存備用。

9.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的制備方法，其特征在于包括胰島素包被的磁微粒的制備、胰島素標記的吖啶酯的制備、化學發光底物液的制備、胰島素抗體定標品的制備。

10.根據權利要求1和權利要求9所述試劑盒的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1）胰島素包被的磁微粒的制備：

取羧基化的納米磁珠懸浮液，磁分離去上清，MES緩沖液重懸，加入EDC水溶液，活化磁珠表面羧基，加入胰島素，室溫下混懸2-10 h，磁分離，去除上清， Tris緩沖液重懸，得到胰島素包被的磁微粒；可選的，羧基化納米磁珠直徑為0.1μm ~ 2.0μm；MES緩沖液濃度為10mM ~ 100mM，pH 5.5 ~ 8.5；

2）胰島素標記的吖啶酯的制備：

取胰島素，加入碳酸鹽緩沖液，混勻，然后加入吖啶酯混勻，室溫下避光反應，1-2 h后取出，離心脫鹽柱脫鹽處理，脫鹽過程中首先分別用純凈水及TBS緩沖液進行處理，最后加入得到的胰島素標記的吖啶酯溶液，收集離心管中的液體至保存管得到胰島素標記的吖啶酯；

3）胰島素抗體定標品的制備：

用標準品緩沖液將胰島素抗體配置成濃度為5 U/mL、20 U/mL 、40U/mL、80 U/mL 、150 U/mL 、300 U/mL ，分裝凍干，4 ℃保存備用；

4）化學發光預激發液的制備：

量取1.0升純化水，依次加入0.5 ~100uL質量分數為20%的雙氧水(H₂O₂)、0.5 ~ 5克防腐劑、0.5 ~ 5克表面活性劑，搖勻后避光存放；可選的，防腐劑為商品化疊氮化鈉、PC300，表面活性劑為吐溫20、吐溫80、Triton X-100、Triton X -405；

5）化學發光激發液的制備：

量取1.0升純化水，依次加入0.2 ~ 1克氫氧化鈉、0.5 ~ 5克防腐劑、0.5 ~ 5克表面活性劑，搖勻后避光存放；可選的，防腐劑為商品化疊氮化鈉、PC300，表面活性劑為吐溫20、吐溫80、Triton X-100、Triton X-405。