[發(fā)明專利]一種抗平滑肌抗體IgG化學發(fā)光免疫檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611018728.2
• 申請日: 2016-11-21
• 公開（公告）號: CN106855569A
• 公開（公告）日: 2017-06-16
• 發(fā)明（設計）人: 王剛;程德淑;周羽;劉星;謝納
• 申請（專利權）人: 深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N33/576;G01N21/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及體外診斷免疫檢測領域，具體地，本發(fā)明提供了一種抗平滑肌抗體IgG的化學發(fā)光免疫檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

抗平滑肌抗體（smooth muscle antibody，SMA）是自身免疫性肝炎的血清學標志抗體。在該疾病患者中SMA的陽性檢出率可達90%。高滴度的SMA（大于1:1000）對診斷自身免疫性肝炎的特異性可達100%。在自身免疫肝炎患者，SMA主要為IgG型，而在原發(fā)性膽汁性肝硬化與自身免疫性肝炎重疊時，常以IgG和IgM型SMA同時出現(xiàn)。在肝外性膽汁堵塞，藥物誘發(fā)性肝病、急性病毒性肝炎及肝癌患者中，SMA的陽性檢出率極低，因此該抗體的檢測有助于自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化的診斷及其他肝臟疾病的鑒別診斷。

SMA IgG亦見于其他一些疾病，如支原體肺炎、傳染性單核細胞增多癥、麻風、患皮膚黏膜淋巴結綜合征的小兒、梅毒、干燥綜合征、類風濕性關節(jié)炎等，腫瘤及病毒感染者也有不同程度的陽性檢出率。

臨床檢測抗平滑肌抗體IgG的常見方法有間接免疫熒光法、酶聯(lián)免疫吸附法，但這些方法都存在著一些不足之處。

一、間接免疫熒光法

該法的基本原理是用特異性的抗體與載玻片中的抗原結合后形成抗原抗體復合物，繼用熒光抗體與抗原抗體復合物結合，形成抗原抗體熒光復合物。在熒光顯微鏡下，根據(jù)復合物的發(fā)光情況來確定所檢測的抗體。該方法評價：由于結合在抗原抗體復合物上的熒光抗體增多，發(fā)出的熒光亮度強，因而其敏感性強。但是其不足也是明顯的：

(1) 在分析結果時無法根據(jù)分子量的大小區(qū)分非特異性識別；

(2) 操作相對復雜，需要價格較昂貴的熒光顯微鏡，在很多基層醫(yī)院難以推廣，也不太適用于標本量較多的實驗室；

(3) 熒光測定中的本底較高，熒光免疫技術用于定量測定有一定困難；

(4) 結果判定需要有經(jīng)驗的專業(yè)人員，分析結果的客觀性不足；

(5) 只能進行定性檢測，不能進行定量測定。

二、酶聯(lián)免疫吸附法

酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）被廣泛應用，但該方法也存在著下述的不足之處：

（1） 使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96孔專用微孔板作為抗原包被用具和反應容器，在使用時只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，無法進行獨立的、單人份的檢測；

（2） 定量測定所用的試劑種類較多，每一種檢測試劑都要用試劑瓶來盛裝，并且每使用一種試劑時都需要更換吸液嘴來分別加注到微孔板的微孔中，不但試劑瓶種類多，加注試劑的操作也極為繁瑣；

（3） 缺少對檢測信息的相應標注，只能通過查看試劑盒外包裝盒的標識才能了解或知悉檢測試劑的生產(chǎn)批號及有效期信息，而且所知悉的信息在檢測過程中不受控，具有很大的隨意性；

（4） 檢測試劑在檢測過程中處于開放的空間，容易引起各種試劑之間的交叉污染而影響檢測結果的準確性；

（5） 檢測過程多采用手工操作，試劑或樣本的加量不很精確，操作過程極為繁瑣和復雜，容易發(fā)生操作差錯，檢測結果的準確度和精密度較差；

（6） 在檢測項目成套試劑的數(shù)量配置及使用上均為項目數(shù)×48/96人份，如果需要檢測10個項目，則試劑的配置及使用數(shù)須為10×48/96人份，如果只有一份樣本需要檢測10個不同的項目，也需要配置10×48/96人份的試劑，存在著不夠經(jīng)濟合理的缺點。

發(fā)明內容

目前抗平滑肌抗體IgG檢測技術存在以下缺點：檢測成本高、檢測靈敏度低、重現(xiàn)性低、不能定量、操作復雜等。

本發(fā)明正是為了克服以上所述缺點，公開了一種檢測成本低、靈敏度高、重現(xiàn)性高、可以定量、操作簡單的抗平滑肌抗體IgG試劑盒及其制備方法。本發(fā)明首先制備化學發(fā)光免疫分析試劑盒，主要包括：平滑肌抗原包被的磁顆粒、鼠抗人IgG抗體包被的吖啶酯以及抗平滑肌抗體IgG定標品；然后利用全自動化學發(fā)光免疫分析儀對定標品進行檢測，繪制標準曲線，內置于電腦軟件，測試實際樣本，根據(jù)樣本發(fā)光值計算樣本濃度；最后對抗平滑肌抗體IgG全自動化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)進行性能（靈敏度、精密度、干擾性）的評價。

本發(fā)明與目前技術相比，具有以下優(yōu)點：

1、本發(fā)明選擇吖啶酯作為標記材料，并應用于化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)，該發(fā)光體系為直接化學發(fā)光，與傳統(tǒng)的酶促化學發(fā)光相比，該反應不需要酶的參與，更加節(jié)約成本；