[發(fā)明專利]一種腎陽虛證動物模型生物標(biāo)志物的篩選及確定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611015606.8
• 申請日: 2016-11-18
• 公開（公告）號: CN106645746B
• 公開（公告）日: 2018-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蘇友新;鄭乃熙;鄭良樸;詹正烜;賴興泉;黃露露;朱亞菊
• 申請（專利權(quán)）人: 福建中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N27/447;G01N27/62
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊;陳彩芳

1.一種腎陽虛證動物模型生物標(biāo)志物的篩選及確定方法，其特征在于，所需具體步驟如下：

（1）腎陽虛證大鼠模型的建立；

（2）差異蛋白的篩選；

（3）對部分與腎陽虛證相關(guān)差異蛋白的驗證；

（4）腎陽虛證動物模型生物標(biāo)志物的確定；

所用于構(gòu)建動物模型的大鼠為WISTAR大鼠；

所述差異蛋白篩選的具體步驟如下：

大鼠松質(zhì)骨總蛋白的提取；

測定蛋白濃度；

雙向凝膠電泳分析；

凝膠蛋白點的檢測與差異蛋白點顯示分析；

差異蛋白的MALDI-TOF-MS質(zhì)譜分析；

蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫檢索及鑒定，確定差異蛋白；

所述部分與腎陽虛證相關(guān)差異蛋白的驗證方法如下：

應(yīng)用Western-Blot方法從蛋白質(zhì)水平對標(biāo)志物進行驗證；

應(yīng)用RT-PCR方法從基因水平對標(biāo)志物進行驗證；

RT-PCR中采用的基因引物為：

Col1a1-F：ATCCTGCCGATGTCGCTATCCA，Col1a1-R：AGCCATCCACAAGCGTGCTGTA；

Arhgdia-F：CATTGTGACCCGCTTGACCT，Arhgdia-R：TCTGTGAAGCGGGACTTGATGT；

GAPDH-F：ACGGCAAGTTCAACGGCACAG，GAPDH-R：GAAGACGCCAGTAGACTCCACGAC；

所述腎陽虛證動物模型生物標(biāo)志物的確定方法為：將血清蛋白的ELISA檢測結(jié)果與Western-Blot、RT-PCR檢測結(jié)果對比分析，選取表達(dá)趨勢一致且在正常值范圍之外的差異蛋白作為生物標(biāo)志物；

最終確定的用作腎陽虛證的血清生物標(biāo)志物為Ⅰ型膠原α-1鏈及GDP解離抑制因子1，且與正常組比較，腎陽虛證大鼠Ⅰ型膠原α-1鏈及GDP解離抑制因子1表達(dá)下降。