[發(fā)明專利]多種益生菌混合發(fā)酵高產(chǎn)工藝

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611010777.1
• 申請日: 2016-11-17
• 公開（公告）號: CN108070537A
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙宏坤;王玉燕;都啟晶
• 申請（專利權(quán)）人: 青島農(nóng)業(yè)大學(xué);青島千迪慷功能食品研制有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.益生菌混合發(fā)酵高產(chǎn)工藝是利用不同乳酸菌混合發(fā)酵存在的共生機制，從而更充分的利用發(fā)酵原料，大大提高活菌量，為工業(yè)化生產(chǎn)高活菌數(shù)的乳酸菌制劑提供參考，方法如下：

步驟一，碳源、氮源、無機鹽等最優(yōu)組分的篩選；

步驟二，培養(yǎng)基各組分最優(yōu)質(zhì)量濃度的確定；

步驟三，最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基的確定；

步驟四，最優(yōu)培養(yǎng)基發(fā)酵條件的優(yōu)化；

步驟五，乳酸菌種子液的制備。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的碳源、氮源、無機鹽等最優(yōu)組分的篩選，主要對所需要的發(fā)酵培養(yǎng)基的不同組分進(jìn)行選擇，從而獲得最利于混合發(fā)酵的培養(yǎng)基，其方法是碳源選擇麥芽糖、蔗糖、葡萄糖、可溶性淀粉；氮源選擇胰蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、硫酸銨、硝酸鈉、胰蛋白胨與酵母膏混合（1:1）；無機鹽選擇KH2PO4、Na2HPO4、NaCl、乙酸鈉、K2HPO4，3株菌種的種子液按1:1:1（接種總量為1.5%）的比例接種于不同培養(yǎng)基中，將培養(yǎng)基初始pH調(diào)節(jié)至7.5，在37℃、200r/min條件下振蕩培養(yǎng)24h，采用紫外可見分光光度計600nm下測定發(fā)酵液的OD值，確定最佳組分為蔗糖、胰蛋白胨酵母膏混合，Na2HPO4。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基各組分最優(yōu)質(zhì)量濃度的確定，其方法是在已經(jīng)確定最佳碳源、氮源、無機鹽種類的基礎(chǔ)選擇不同濃度進(jìn)行混合發(fā)酵試驗，最佳碳源的濃度5g/L、7.5g/L、10g/L、12.5g/L、15g/L；最佳氮源濃度5g/L、7.5g/L、10g/L、12.5g/L、15g/L；最佳無機鹽濃度4g/L、5g/L、6g/L、7g/L、8g/L，培養(yǎng)基初始pH7.5，在37℃、200r/min條件下振蕩培養(yǎng)24h，采用紫外可見分光光度計600nm下測定發(fā)酵液的OD值，確定最佳濃度分別為碳源7.5g/L，氮源10g/L，無機鹽6g/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基的確定，將試驗中篩選出的最佳碳源、氮源、無機鹽及其濃度范圍按L9（34）正交表進(jìn)行正交試驗，培養(yǎng)基初始pH7.5 ，接種量1.5%，發(fā)酵溫度37℃，搖床轉(zhuǎn)速200r/min，24小時后測發(fā)酵液OD值，結(jié)果為蔗糖10g/L，胰蛋白胨10g/L，酵母膏10g/L，Na2HPO4 7g/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述最優(yōu)培養(yǎng)基發(fā)酵條件的優(yōu)化，用優(yōu)化的最佳培養(yǎng)基進(jìn)行復(fù)合菌發(fā)酵，選取26℃、28℃、31℃、34℃、37℃和40℃ 作為發(fā)酵溫度，測定不同溫度下復(fù)合菌的OD值；選取0.5%，1%，2%，3% 接種量，測定不同接種量下OD值；選取5.5，6.0，6.5，7.0，7.5，8.0，8.5和9.0作為初始pH，測定不同初始pH下復(fù)合菌發(fā)酵后的OD值；選取100 r/min，120 r/min，140 r/min，160 r/min，180 r/min，200 r/min和220 r/min 搖床轉(zhuǎn)速，測定不同轉(zhuǎn)速下復(fù)合菌發(fā)酵后的OD值，最佳溫度、接種量、初始pH、轉(zhuǎn)速分別為37℃、0.5%、8.5、200r/min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述乳酸菌種子液的制備，將三株菌種種子液按照0.5%接種量接種于優(yōu)化得到的最佳培養(yǎng)基中，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的初始pH為8.5，在37℃、200r/min搖床培養(yǎng)，發(fā)酵16h時達(dá)到對數(shù)生長期的最高峰，通過微量計數(shù)得到此時的活菌數(shù)為1.8×1013 cfu/mL。