[發明專利]一種脊尾白蝦胚胎顯微注射方法及利用方法構建mRNA過表達模型在審
| 申請號： | 201611006768.5 | 申請日： | 2016-11-16 |
| 公開（公告）號： | CN108070617A | 公開（公告）日： | 2018-05-25 |
| 發明（設計）人： | 張繼泉;宋鳳閣;桂天書;相建海 | 申請（專利權）人： | 中國科學院海洋研究所 |
| 主分類號： | C12N15/89 | 分類號： | C12N15/89;C12N15/873;A01K67/033 |
| 代理公司： | 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002 | 代理人： | 李穎;周秀梅 |
| 地址： | 266071*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 脊尾白蝦 顯微注射 胚胎 構建 體外轉錄 甲殼動物 單細胞期 高滲透壓 功能基因 重要理論 注射材料 基因 蝦類 應用 成功 研究 | ||
【權利要求書】：
1.一種脊尾白蝦胚胎顯微注射方法，其特征在于：將高滲透壓的顯微注射體系在特定的顯微注射條件下向脊尾白蝦單細胞時期(1細胞)胚胎進行顯微注射。
2.按權利要求1所述的脊尾白蝦胚胎顯微注射方法，其特征在于：所述高滲透壓的顯微注射體系為顯微注射緩沖液和顯微注射液；其中，顯微注射緩沖液：無酶水配制含終濃度為100mM HEPES和1.5M NaCl的溶液；
顯微注射液為注射材料和指示劑；其中，注射材料為經無酶水稀釋的體外轉錄EGFPmRNA，mRNA稀釋至400ng/μL；指示劑為酚紅溶液。
3.按權利要求1所述的脊尾白蝦胚胎顯微注射方法，其特征在于：所述顯微注射條件為壓強為80Pa；顯微注射的量為0.5nL；顯微注射的時間為0.7s；顯微注射后的受精卵培養環境為離體孵育在經0.22μm濾膜抽濾的新鮮海水中。
4.一種利用權利要求1所述脊尾白蝦胚胎顯微注射方法構建體外轉錄模型，其特征在于：以體外轉錄mRNA作為注射材料，采用所述脊尾白蝦胚胎顯微注射方法，構建體外過表達mRNA的脊尾白蝦模型。
5.按權利要求4所述的利用所述脊尾白蝦胚胎顯微注射方法構建體外轉錄模型，其特征在于：以體外轉錄合成的EGFP mRNA作為注射材料，采用所述脊尾白蝦胚胎顯微注射方法，構建體外過表達EGFP mRNA的脊尾白蝦模型。
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