[發明專利]毛細管電泳結合UPLC-MS分析PQQ對兒茶酚胺神經遞質調節作用的研究方法

有效

• 申請號: 201611002722.6
• 申請日: 2016-11-15
• 公開（公告）號: CN106706746B
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 周杏琴;顧曉波;徐希杰;毛師師;欽曉峰
• 申請（專利權）人: 江蘇省原子醫學研究所
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447;G01N30/02
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時旭丹;張仕婷

毛細管電泳結合UPLC?MS分析PQQ對兒茶酚胺神經遞質調節作用的研究方法，屬于生物分析技術領域。本發明采用陽離子固相萃取對腦組織進行提取，測定了慢性應激抑郁模型鼠腦內兒茶酚胺含量的變化及PQQ與兒茶酚胺反應產物變化，使PQQ與NE、E及產物達到較好的分離，并采用UPLC?MS對PQQ與兒茶酚胺反應產物進行鑒別，結果發現PQQ與NE發生反應生成PQQNE，而與E不發生反應。慢性應激抑郁模型組在額葉及海馬NE含量顯著升高，而給予一定劑量PQQ組NE含量顯著降低，E含量各組無顯著差異。PQQ對兒茶酚胺神經遞質的調節可能主要通過調節NE，而對E不具有調節作用。對抑郁癥疾病機理及抑郁癥靶向藥物研究具有指導意義。

技術領域

吡咯并喹呤醌（PQQ）對兒茶酚胺神經遞質的調節作用的研究方法，屬于生物分析技術領域。

背景技術

去甲腎上腺素（NE）和腎上腺素（E），是人體內一類重要的兒茶酚胺神經遞質（結構式見下圖）。其結構中含有多個羥基活性基團。

兒茶酚胺神經遞質由腎上腺髓質嗜鉻細胞以及元嗜鉻細胞分泌，在中樞神經內廣泛分布，是中樞神經系統中極為重要的信息傳遞者。正常含量的兒茶酚胺在人體的神經系統和心血管系統等多種生理功能平衡中起著極其重要的調節作用，直接影響人體的代謝水平。某些代謝障礙會引起兒茶酚胺含量發生改變，從而導致重要疾病發生。例如重性抑郁癥患者腦內NE含量明顯增高，嗜鉻細胞瘤患者血內NE水平升高。E對糖代謝有明顯影響，應激引起交感神經-腎上腺髓質系統興奮，E持續大量的釋放，引起血糖升高。應激也可通過神經傳導直接作用胰腺，抑制胰島素的分泌。有研究發現慢性應激使大鼠血漿E含量升高。檢測生物體內兒茶酚胺的濃度對上述嚴重疾病的臨床診斷具有重要的參考價值。

吡咯并喹呤醌(PQQ)是一種氧化還原酶輔基，主要分布于原核生物以及部分植物和哺乳動物之中，對N-甲基-D-天冬氨酸受體（NMDAR）介導的興奮性神經毒性具有調節作用。PQQ在神經精神疾病方面，具有較重要的研究前景。它具有較強的自由基清除功能。本研究室在前期研究中發現PQQ中的共軛醌鍵與氨基酸類神經遞質中的氨基發生共軛反應而對神經遞質的平衡具有潛在的調節功能。近來本課題組在抑郁癥動物模型研究中采用PQQ干預后進行行為學評價發現一定劑量的PQQ對抑郁癥具有明顯的抑制作用。PQQ具有多個羧基的特殊化學結構，易與生物體內的多種活性物質發生反應；而兒茶酚胺結構中含有多個羥基活性基團。本發明擬通過體外研究PQQ與NE及 E 的反應，并通過測量慢性應激抑郁癥模型鼠、以及給予一定劑量PQQ用藥后腦內兒茶酚胺的含量變化，并通過UPLC-MS確證PQQ與NE發生反應生成PQQNE，探討PQQ在抑郁癥中對兒茶酚胺的調節作用，為研究PQQ在抑郁癥神經保護方面的作用機制提供重要的研究價值，對疾病的診斷和預防治療有重要意義。

越來越多的研究顯示兒茶酚胺在疾病發生及進展過程中扮演了重要角色，科研工作者逐漸關注兒茶酚胺類物質的作用機制，這就需要提供快速精確的分析方法。目前報道的兒茶酚胺類物質的檢測方法各種各樣，其中主要以高效液相色譜方法為主，結合電化學、熒光或質譜檢測器測定。這些方法各有優劣，比較常用的是高效液相色譜－電化學檢測，但由于生物樣本中干擾因素較多，而這些方法并不能徹底消除干擾，因而在臨床應用中受到限制。

毛細管電泳方便快速，樣品量少，具有高效靈敏的特點而受到廣大分析工作者的重視。有文獻報道毛細管電泳－間接電致化學發光檢測尿中兒茶酚胺的含量，但每實驗2 h必須更新電致化學發光溶液。另有文獻報道采用異硫氰酸熒光素(FITC)對E和NE進行衍生，采用毛細管電泳加光纖發光二極管誘導熒光檢測器測定尿中NE和E的含量，這些方法均需要特殊的檢測器才能完成檢測。

發明內容