[發明專利]基于高效液相色譜的對乳制品中β-酪蛋白分型的方法

在審

• 申請號: 201610983381.9
• 申請日: 2016-11-09
• 公開（公告）號: CN108072725A
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發明（設計）人: 劉林;呂小青;趙鳳;水明;趙鳳茹;王彥平;李艷華;張建聰;曾伊凡;李智洋;高耀超
• 申請（專利權）人: 北京奶牛中心
• 主分類號: G01N30/74
• 分類號: G01N30/74;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 北京匯智英財專利代理事務所(普通合伙) 11301
• 代理人: 何暉

本發明涉及一種基于高效液相色譜的對乳制品中β?酪蛋白分型的方法，包括如下步驟：S1：制備β?酪蛋白標準品；S2：制備β?酪蛋白樣品；S3：制備第一流動相和第二流動相；S4：在液相色譜儀中進樣樣品后，不同時間以不同濃度比例的第一流動相和第二流動相的混合液分別沖洗樣品和標準品，根據標準品中β?酪蛋白兩種不同結構樣品的出峰時間，實現β?酪蛋白樣品中不同結構樣品的分離；其中，所述第一流動相為三氟乙酸水溶液，第二流動相為乙腈溶液。本發明提供的基于高效液相色譜的對乳制品中β?酪蛋白分型的方法，簡單易行、方便可靠、重現性好、準確度高，能夠實現對樣品的批量檢測，大大減少分析時間。

技術領域

本發明涉及儀器分析技術領域，具體涉及一種基于高效液相色譜的對乳制品中β-酪蛋白分型的方法。

背景技術

近幾年研究發現，β-酪蛋白根據其結構的不同可分為A1、A2、B等多種類型。含有A2型β-酪蛋白的牛奶中不含有BCM7，這種牛奶叫做A2牛奶。A2β-酪蛋白是現代奶牛β-酪蛋白的天然原型。基于A2β-酪蛋白制成的配方奶粉，可能與母乳更接近，更有利于促進嬰幼兒的生長發育。

β-酪蛋白是人乳和牛乳中的一種主要蛋白，且廣泛存在于各種乳制品中。牛乳中的β-酪蛋白有兩個主要的變異型，A1和A2。A1和A2β-酪蛋白的蛋白質結構存在差異，A1型β-酪蛋白的第67位為組氨酸，因此其前7個氨基酸殘基可以被裂解產生β-酪啡肽-7(BCM-7)。A2型的第67位則為脯氨酸，則不會生成BCM-7。正是這種結構差異,使A2β-酪蛋白比A1更接近天然母乳中的蛋白質。實驗證明，A2β-酪蛋白有潛力改善寶寶的消化功能，促進寶寶對營養物質的吸收，呵護寶寶稚嫩的消化系統；含有A2β-酪蛋白的配方，從源頭上最大程度地避免了(由A1酪蛋白引起的)不良的健康反應。這個觀點已得到全球100多項科學論文的支持和認同。

發明內容

為了對乳制品中的β-酪蛋白進行有效的分離，得到最有利于人體健康的產品，本發明提供了一種基于高效液相色譜的對乳制品中β-酪蛋白分型的方法，包括如下步驟：

S1：制備β-酪蛋白標準品；

S2：制備β-酪蛋白樣品；

S3：制備第一流動相和第二流動相；

S4：在液相色譜儀中進樣樣品后，在不同時間以不同濃度比例的第一流動相和第二流動相的混合液分別沖洗β-酪蛋白樣品和β-酪蛋白標準品，根據β-酪蛋白標準品中β-酪蛋白兩種不同結構樣品的出峰時間，實現β-酪蛋白樣品中不同結構樣品的分離；

其中，所述第一流動相為三氟乙酸水溶液，第二流動相為乙腈溶液。

其中，所述步驟S4中，從β-酪蛋白樣品中分離出的不同結構樣品分別為A1型β-酪蛋白以及A2型β-酪蛋白。

其中，所述β-酪蛋白樣品的制備方法包括：

S21：取冷凍奶樣，加入第一工作液，使冷凍奶樣融化后振蕩混勻，室溫靜置得混合液；

S22：將混合液離心，去除表層乳脂，得底層溶液；

S23：將底層溶液以第二工作液稀釋，混勻、過濾得β-酪蛋白樣品。

其中，所述第一工作液為雙-三羥甲基氨基甲烷緩沖液、鹽酸胍、檸檬酸鈉以及二硫蘇糖醇的混合液，其中，混合液中各物質的摩爾濃度分別介于：0.05-0.15mol/L、4-8mol/L、5-8mmol/L、15-25mmol/L；

所述第二工作液的溶劑為質量濃度介于0.5-1.5g/L的三氟乙酸溶液，溶質為鹽酸胍，鹽酸胍的濃度介于4-6mol/L。

其中，所述步驟S22中，相對離心力介于14000-20000g，離心時間介于2-6min，離心溫度為介于2-6℃。