[發(fā)明專利]基于高效液相色譜的對(duì)乳制品中β-酪蛋白分型的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610983381.9
• 申請(qǐng)日: 2016-11-09
• 公開（公告）號(hào): CN108072725A
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉林;呂小青;趙鳳;水明;趙鳳茹;王彥平;李艷華;張建聰;曾伊凡;李智洋;高耀超
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京奶牛中心
• 主分類號(hào): G01N30/74
• 分類號(hào): G01N30/74;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 北京匯智英財(cái)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11301
• 代理人: 何暉

1.一種基于高效液相色譜的對(duì)乳制品中β-酪蛋白分型的方法，其特征在于：包括如下步驟：

S1：制備β-酪蛋白標(biāo)準(zhǔn)品；

S2：制備β-酪蛋白樣品；

S3：制備第一流動(dòng)相和第二流動(dòng)相；

S4：在液相色譜儀中進(jìn)樣樣品后，在不同時(shí)間以不同濃度比例的第一流動(dòng)相和第二流動(dòng)相的混合液分別沖洗β-酪蛋白樣品和β-酪蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，根據(jù)β-酪蛋白標(biāo)準(zhǔn)品中β-酪蛋白兩種不同結(jié)構(gòu)樣品的出峰時(shí)間，實(shí)現(xiàn)β-酪蛋白樣品中不同結(jié)構(gòu)樣品的分離；

其中，所述第一流動(dòng)相為三氟乙酸水溶液，第二流動(dòng)相為乙腈溶液。

2.如權(quán)利要求1所述的基于高效液相色譜的對(duì)乳制品中β-酪蛋白分型的方法，其特征在于：所述步驟S4中，從β-酪蛋白樣品中分離出的不同結(jié)構(gòu)樣品分別為A1型β-酪蛋白以及A2型β-酪蛋白。

3.如權(quán)利要求1所述的基于高效液相色譜的對(duì)乳制品中β-酪蛋白分型的方法，其特征在于：所述β-酪蛋白樣品的制備方法包括：

S21：取冷凍奶樣，加入第一工作液，使冷凍奶樣融化后振蕩混勻，室溫靜置得混合液；

S22：將混合液離心，去除表層乳脂，得底層溶液；

S23：將底層溶液以第二工作液稀釋，混勻、過濾得β-酪蛋白樣品。

4.如權(quán)利要求3所述的基于高效液相色譜的對(duì)乳制品中β-酪蛋白分型的方法，其特征在于：

所述第一工作液為雙-三羥甲基氨基甲烷緩沖液、鹽酸胍、檸檬酸鈉以及二硫蘇糖醇的混合液，其中，混合液中各物質(zhì)的摩爾濃度分別介于：0.05-0.15mol/L、4-8mol/L、5-8mmol/L、15-25mmol/L；

所述第二工作液的溶劑為質(zhì)量濃度介于0.5-1.5g/L的三氟乙酸溶液，溶質(zhì)為鹽酸胍，鹽酸胍的濃度介于4-6mol/L。

5.如權(quán)利要求3所述的基于高效液相色譜的對(duì)乳制品中β-酪蛋白分型的方法，其特征在于：所述步驟S22中，相對(duì)離心力介于14000-20000g，離心時(shí)間介于2-6min，離心溫度介于2-6℃。

6.如權(quán)利要求3所述的基于高效液相色譜的對(duì)乳制品中β-酪蛋白分型的方法，其特征在于：所述步驟S21中，冷凍奶樣與第一工作液的體積比為1：1。

7.如權(quán)利要求3所述的基于高效液相色譜的對(duì)乳制品中β-酪蛋白分型的方法，其特征在于：所述步驟S23中，底層溶液與第二工作液的體積比為1：3。

8.如權(quán)利要求1所述的基于高效液相色譜的對(duì)乳制品中β-酪蛋白分型的方法，其特征在于：所述第一流動(dòng)相中，三氟乙酸的質(zhì)量濃度介于0.5-1.5g/L。

9.如權(quán)利要求1所述的基于高效液相色譜的對(duì)乳制品中β-酪蛋白分型的方法，其特征在于：所述高效液相色譜的色譜條件為：柱溫介于40-50℃，吸收波長(zhǎng)介于200-250nm，流速介于0.3-0.6mL/min，進(jìn)樣體積介于8-12uL。

10.如權(quán)利要求1所述的基于高效液相色譜的對(duì)乳制品中β-酪蛋白分型的方法，其特征在于：所述步驟S4中，所用的反相色譜柱為C8 3.5μm150mm×4.6mm或與其性能相當(dāng)?shù)纳V柱。