[發明專利]核酸?脂聚合物組合物

在審

• 申請號: 201610978325.6
• 申請日: 2008-08-06
• 公開（公告）號: CN107049965A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 馬杰德.馬塔;賈森.費韋爾;丹尼.H.劉易斯;庫希德.安沃
• 申請（專利權）人: CLSN實驗室股份有限公司
• 主分類號: A61K9/19
• 分類號: A61K9/19;A61K47/26;A61K47/36;A61K47/38;A61K9/00
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所11105
• 代理人: 張雅莉

本申請是申請日為2008年8月6日、申請號為200880110306.5、發明名稱“核酸-脂聚合物組合物”的專利申請的分案申請。

技術領域

本發明涉及包含核酸和脂聚合物的濃縮穩定制劑，還涉及所述制劑的制備方法和應用。因此，本發明涉及分子生物學和生物化學領域。

背景技術

由于其更好的安全順應性、簡單的化學和經濟有效的制造，合成基因傳輸載體具有比病毒載體更顯著的優點。然而，由于合成載體與病毒載體相比較低的轉染效率，因而大多數對合成基因傳輸體系的開發致力于改善傳輸效率。結果，盡管在制劑穩定性、擴大規模和給藥靈活性中已經發現問題，但對合成傳輸體系的藥物開發卻幾乎沒有給予關注。自組裝為納米顆粒的含DNA藥物常常顯示出較差的穩定性，特別是當制劑為水性懸浮液時。在這類制劑中，帶有合成載體的DNA通常會隨時間進行而聚集，尤其在臨床設定中的最佳給藥所需的濃度時。這類制劑往往難以制備濃度>0.3mg/ml的DNA，這限制了其商業應用，尤其是對于其中體積的約束會限制靈活給藥的局部輸送。DNA聚集降低或消除了DNA的活性并因此使組合物不適于在治療中使用。

所述物理不穩定性是轉染活性損失的基本原因之一。由于脂雙層的高曲率或脂質從DNA物理解離而表現出的顆粒破裂或融合也已經被假定為基于陽離子脂質的基因傳輸復合物的不良穩定性和聚集的可能的根本原因。如傳輸載體的氧化性水解等化學修飾也可能促成顆粒不穩定性。

由于不良穩定性，早期臨床試驗需要在病床邊制備DNA制劑。不具備制備和儲存濃度為最佳給藥所需的臨床產品的能力是病毒DNA產品在廣泛臨床實踐和商業化中的主要障礙。這將需要培訓過藥物配方的醫師并提出實地質量控制措施。

凍干法是一種有用的用于改善多種藥品的長期穩定性的方法。然而，該方法一般不適于干燥帶有合成載體的DNA復合物，這是因為如此易于改變所述DNA復合物的物理化學性質并導致聚集和在復水(reconstitution)時轉染的損失。

已經嘗試了若干方法以避免制劑在凍干過程中聚集和損傷。在某些情況下，在如低分子量糖、葡聚糖和聚乙二醇等冷凍保護劑的存在下凍干DNA復合物可以對產品提供更好的穩定性，但該方法似乎沒有改善給藥靈活性。出于這一目的通常最常用的方法是添加糖。已發現測試糖中許多會在某種程度上避免制劑的損傷和顆粒聚集，但該效果的品質隨糖的種類和所用的傳輸載體的不同而變化。

盡管凍干提供了對制劑保存期的一定改善，生產凍干DNA產品所需要的條件使得僅能用于有限的藥學應用。即使采用最有效的凍干保護劑糖，也需要很高的糖/DNA摩爾比(通常大于1000:1)以獲得穩定性。結果，往往必須將凍干產品稀釋很大的倍數以獲得等滲制劑，而這導致最終DNA濃度降至凍干前的DNA濃度。對于許多陽離子載體，最終DNA濃度通常可為約0.1mg/ml～0.2mg/ml，且常常低于0.1mg/ml。盡管低濃度制劑足以用于體外研究，其臨床應用可能因最佳給藥的高體積需求而受到限制。例如，在穩定性所需的最佳糖濃度下，1mg的DNA劑量可能需要被稀釋在5ml～10ml中以保持等滲性，這對于局部體內施用而言體積過大。抑制了靈活給藥的這種藥學限制是合成基因傳輸體系在人類臨床試驗中效力不理想的主要促成因素之一，并且確證需要穩定且生物活性的更濃縮的DNA制劑。

發明內容

本發明提供了在高核酸濃度下展示出出人意料的穩定性并且增加核酸轉染的效率和給藥靈活性的組合物。本文所述的組合物能被有效地凍干并復水為包括高核酸濃度在內的各種核酸濃度，而不會損失生物活性或使核酸聚集。

在一方面，本發明提供了包含陽離子脂聚合物和至少約0.5mg/ml的核酸的混合物的組合物，優選為藥物組合物，其中所述混合物懸浮于水溶液中。所述陽離子脂聚合物包含具有獨立地與其共價相連的膽固醇和聚乙二醇基團的陽離子聚合物主鏈。膽固醇與陽離子聚合物主鏈的摩爾比是約0.1～約10，而聚乙二醇與陽離子聚合物主鏈的摩爾比是約0.1～約10。所述組合物還可包含填料賦形劑。在某些方面，核酸與脂聚合物的混合物形成復合物。在某些方面，所述組合物包含縮合的核酸。縮合的核酸的量通常取決于核酸的組成性構成和制備組合物時的條件。

本發明還提供了制備上述組合物的方法。