[發(fā)明專利]細(xì)胞分離裝置以及細(xì)胞分離方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610975714.3
• 申請日: 2016-11-07
• 公開（公告）號: CN106635769B
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 姜維;吳慶軍
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市達(dá)科為生物工程有限公司
• 主分類號: C12M1/24
• 分類號: C12M1/24;C12M1/12;C12M1/00;C12N5/0783;C12N5/09
• 代理公司: 深圳新創(chuàng)友知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44223
• 代理人: 江耀純

本發(fā)明公開了一種細(xì)胞分離裝置，包括內(nèi)管和外管，所述內(nèi)管的開口端設(shè)有向外延伸的凸緣以讓所述內(nèi)管套設(shè)在所述外管的開口端，所述內(nèi)管的底部與所述外管的底部之間設(shè)有預(yù)設(shè)距離，用于容納進(jìn)入到所述外管中的未被三維抗體網(wǎng)捕獲的單細(xì)胞，所述內(nèi)管的底部為多孔結(jié)構(gòu)，用于分離所述未被三維抗體網(wǎng)捕獲的單細(xì)胞和被三維抗體網(wǎng)捕獲的細(xì)胞；所述未被三維抗體網(wǎng)捕獲的單細(xì)胞可通過所述多孔結(jié)構(gòu)進(jìn)入到所述外管，所述被三維抗體網(wǎng)捕獲的細(xì)胞隨三維抗體網(wǎng)一起被所述多孔結(jié)構(gòu)截留在所述內(nèi)管。使用本發(fā)明中的細(xì)胞分離裝置，通過三維抗體網(wǎng)捕獲特定類型的細(xì)胞能夠有效地實現(xiàn)細(xì)胞的分離。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及臨床醫(yī)學(xué)和生物科學(xué)領(lǐng)域，特別是細(xì)胞分離裝置以及細(xì)胞分離方法。

背景技術(shù)

細(xì)胞分選是細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)最重要的技術(shù)方法及必要前提，目前技術(shù)比較成熟且應(yīng)用較廣泛，主要有：密度梯度離心法、免疫密度離心法、免疫磁珠法和流式技術(shù)等。其中，密度梯度離心法是根據(jù)細(xì)胞的密度來實現(xiàn)特定類型細(xì)胞的分離，其操作簡單，成本低，但只能對細(xì)胞群體進(jìn)行粗略的分離，不能滿足臨床和科研上復(fù)雜的細(xì)胞分離需要；免疫密度離心法、免疫磁珠法和流式分選法都是基于抗體捕獲細(xì)胞的原理，結(jié)合其他技術(shù)實現(xiàn)特定類型的細(xì)胞分離，這些分離技術(shù)雖然能夠?qū)崿F(xiàn)特定類型細(xì)胞的分離，但操作復(fù)雜、分離效率低、成本高，限制了其在臨床上的大規(guī)模應(yīng)用。

三維抗體網(wǎng)細(xì)胞分離法，是結(jié)合三維細(xì)胞培養(yǎng)(3D培養(yǎng))和抗體捕獲細(xì)胞的原理，開發(fā)的一種新的細(xì)胞分離方法。

三維細(xì)胞培養(yǎng)就是將細(xì)胞置于具有三維立體結(jié)構(gòu)的載體中，如水凝膠、多孔PLGA支架等，再加入培養(yǎng)液在體外進(jìn)行培養(yǎng)，使得細(xì)胞感到好像仍然在體內(nèi)的微環(huán)境中一樣，可以在三維空間中遷移、生長，形成多細(xì)胞聚集體等。三維培養(yǎng)基質(zhì)是在細(xì)胞培養(yǎng)過程當(dāng)中為細(xì)胞提供黏附、增殖和分化所需要的支撐材料，也充當(dāng)支架。三維培養(yǎng)基質(zhì)需要具有良好的細(xì)胞相容性，有一定的機械力學(xué)性能，內(nèi)部有大量的孔隙結(jié)構(gòu)。目前常用的三維培養(yǎng)基質(zhì)主要包括動物性凝膠、非動物性基質(zhì)材料和合成高分子凝膠類。

基于抗體分離細(xì)胞的方法，利用細(xì)胞表面特定的標(biāo)志物，通過抗體和細(xì)胞表面的抗原結(jié)合，從而特異性捕獲細(xì)胞?；谠撛淼募?xì)胞分選方法很多，但大多效率較低。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)細(xì)胞分離效果差的技術(shù)問題，本發(fā)明提出一種細(xì)胞分離裝置以及使用該裝置的細(xì)胞分離方法。

本發(fā)明的技術(shù)問題通過以下的技術(shù)方案予以解決：一種細(xì)胞分離裝置，包括內(nèi)管和外管，所述內(nèi)管的開口端設(shè)有向外延伸的凸緣以讓所述內(nèi)管套設(shè)在所述外管的開口端，所述內(nèi)管的底部與所述外管的底部之間設(shè)有預(yù)設(shè)距離，用于容納進(jìn)入到所述外管中的未被三維抗體網(wǎng)捕獲的單細(xì)胞，所述內(nèi)管的底部為多孔結(jié)構(gòu)，用于分離所述未被三維抗體網(wǎng)捕獲的單細(xì)胞和被三維抗體網(wǎng)捕獲的細(xì)胞；所述未被三維抗體網(wǎng)捕獲的單細(xì)胞可通過所述多孔結(jié)構(gòu)進(jìn)入到所述外管，所述被三維抗體網(wǎng)捕獲的細(xì)胞隨三維抗體網(wǎng)一起被所述多孔結(jié)構(gòu)截留在所述內(nèi)管。本發(fā)明還提供了利用細(xì)胞分離裝置的細(xì)胞分離方法，包括S1、制備生物樣本的單細(xì)胞懸液；S2、生物相容性高的高分子材料偶聯(lián)抗體，制備三維抗體網(wǎng)溶液；S3、將制備的三維抗體網(wǎng)溶液和單細(xì)胞懸液先后加入到細(xì)胞分離裝置的內(nèi)管中，顛倒混勻，室溫孵育；S4、離心處理，被三維抗體網(wǎng)捕獲的細(xì)胞留在內(nèi)管，未被三維抗體網(wǎng)捕獲的單細(xì)胞進(jìn)入到外管。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)對比的有益效果包括：采用細(xì)胞分離裝置進(jìn)行細(xì)胞分離時，通過采用三維抗體網(wǎng)捕獲細(xì)胞在提高對樣本中稀有細(xì)胞捕獲效率的基礎(chǔ)上，實現(xiàn)了對表達(dá)某一特定抗原的細(xì)胞的高準(zhǔn)確性捕獲，有效的實現(xiàn)了細(xì)胞的分離，而且操作簡單，只需要一次離心就可以實現(xiàn)細(xì)胞的快速分選，大大節(jié)約了分選的時間，降低了分選實驗的難度；另外三維抗體網(wǎng)由生物相容性高的高分子材料和抗體構(gòu)成，對細(xì)胞無毒無損傷，獲得的細(xì)胞可用于后面的檢測或?qū)嶒灐?/p>

附圖說明

圖1是本發(fā)明高效細(xì)胞分離裝置示意圖。