[發明專利]細胞分離裝置以及細胞分離方法

有效

• 申請號: 201610975714.3
• 申請日: 2016-11-07
• 公開（公告）號: CN106635769B
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發明（設計）人: 姜維;吳慶軍
• 申請（專利權）人: 深圳市達科為生物工程有限公司
• 主分類號: C12M1/24
• 分類號: C12M1/24;C12M1/12;C12M1/00;C12N5/0783;C12N5/09
• 代理公司: 深圳新創友知識產權代理有限公司 44223
• 代理人: 江耀純

1.一種細胞分離裝置，其特征在于，包括內管和外管，所述內管的開口端設有向外延伸的凸緣以讓所述內管套設在所述外管的開口端，所述內管的底部與所述外管的底部之間設有預設距離，用于容納進入到所述外管中的未被三維抗體網捕獲的單細胞，所述內管的底部為多孔結構，用于分離所述未被三維抗體網捕獲的單細胞和被三維抗體網捕獲的細胞；所述未被三維抗體網捕獲的單細胞可通過所述多孔結構進入到所述外管，所述被三維抗體網捕獲的細胞隨三維抗體網一起被所述多孔結構截留在所述內管；

所述的三維抗體網由生物相容性高的高分子材料分散在水中形成的三維立體網狀結構和偶聯到所述三維立體網狀結構的抗體組成；

所述生物相容性高的高分子材料是一種三維培養基質，可以分散在水溶液中形成三維立體網結構，該網狀結構不改變液體的流動性；

當樣本加入到三維抗體網中，特定類型的細胞會被三維抗體網上的抗體捕獲，捕獲后的細胞與抗體網形成較大的交聯結構，離心時無法通過多孔結構而被截留，在多孔結構的上層即可收獲到特定類型的細胞。

2.如權利要求1所述的細胞分離裝置，其特征在于，所述生物相容性高的高分子材料包括改性膠原、改性聚糖或小分子高聚物。

3.如權利要求1所述的細胞分離裝置，其特征在于，所述偶聯方式包括物理吸附或共價結合。

4.如權利要求1所述的細胞分離裝置，其特征在于，所述三維立體網狀結構的孔徑為30-1000μm。

5.如權利要求4所述的細胞分離裝置，其特征在于，所述三維立體網狀結構的孔徑為50-500μm。

6.如權利要求5所述的細胞分離裝置，其特征在于，更優選地所述三維立體網狀結構的孔徑為100-300μm。

7.如權利要求1所述的細胞分離裝置，其特征在于，所述多孔結構的孔徑為20-100μm。

8.如權利要求7所述的細胞分離裝置，其特征在于，所述多孔結構的孔徑為30-70μm。

9.如權利要求1所述的細胞分離裝置，其特征在于，所述多孔結構包括篩網或篩板。

10.一種利用如權利要求1-9任一細胞分離裝置的細胞分離方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、制備生物樣本的單細胞懸液；

S2、生物相容性高的高分子材料偶聯抗體，制備三維抗體網溶液；

S3、將制備的三維抗體網溶液和單細胞懸液先后加入到細胞分離裝置的內管中，顛倒混勻，室溫孵育；

S4、離心處理，被三維抗體網捕獲的細胞留在內管中，未被三維抗體網捕獲的單細胞進入到了外管中；

所述的三維抗體網由生物相容性高的高分子材料分散在水中形成的三維立體網狀結構和偶聯到所述三維立體網狀結構的抗體組成；

所述生物相容性高的高分子材料是一種三維培養基質，可以分散在水溶液中形成三維立體網結構，該網狀結構不改變液體的流動性；

當樣本加入到三維抗體網中，特定類型的細胞會被三維抗體網上的抗體捕獲，捕獲后的細胞與抗體網形成較大的交聯結構，離心時無法通過多孔結構而被截留，在多孔結構的上層即可收獲到特定類型的細胞。

11.如權利要求10所述的細胞分離方法，其特征在于，在步驟S3中所述室溫孵育的時間為20-60min；在步驟S4中所述離心處理的離心力為250-800g，所述離心處理的離心時間為10-30min。

12.如權利要求10-11任一所述的細胞分離方法在外周血單個核細胞中T淋巴細胞的富集、外周血單個核細胞中CD45+細胞的去除或全血中循環腫瘤細胞的富集的應用。