[發明專利]用于檢測去勢抵抗性前列腺癌的ELISA試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201610972678.5
• 申請日: 2016-10-28
• 公開（公告）號: CN106526185B
• 公開（公告）日: 2018-03-30
• 發明（設計）人: 楊闊
• 申請（專利權）人: 拜爾康(天津)醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及免疫測定法技術領域，尤其涉及用于檢測去勢抵抗性前列腺癌的ELISA試劑盒及檢測方法。

背景技術

前列腺癌是男性泌尿系統最常見的惡性腫瘤，在歐美國家較為常見，是男性最常見的惡性腫瘤，占所有惡性腫瘤的第二位。我國是傳統的前列腺癌發病率較低的國家，但是近年來隨著人民生活水平的提高，環境的改變，以及疾病篩查普及率的提高，我國的前列腺癌發病率正在逐年上升。前列腺癌已成為威脅我國男性健康的一種重要疾病，正在受到越來越多的關注和重視。

前列腺癌最重要的治療方式之一就是去勢療法，包括藥物抗雄激素治療以及手術去勢治療，以阻止雄激素結合到雄激素受體上的方式來抑制腫瘤的生長。在前列腺癌早期，去勢治療有較好的效果，但是經過一段時間的治療之后，前列腺癌逐漸轉變為雄激素非依賴性的，對去勢治療不再敏感，病情再度惡化，即去勢抵抗性前列腺癌(CRPC)階段。去勢抵抗性前列腺癌的發病機制目前尚不清楚，也沒有較好的治療方法，是前列腺癌基礎與臨床領域的難題。

目前對于去勢抵抗性前列腺癌的診斷并沒有很好的方法，主要是依靠監測前列腺特異性抗原和睪酮的變化，以及根據臨床表現來綜合判斷，缺乏較好的特異性，不能準確地判斷出去勢抵抗性前列腺癌。及早地發現去勢抵抗性前列腺癌，對后期治療策略的制定和對前列腺癌更加深入地從分子水平認識，有著非常重要的意義。

發明內容

本發明就是為了解決現有技術中檢測去勢抵抗性前列腺癌的產品或方法特異性差、準確性不高的問題，所提出的一種用于檢測去勢抵抗性前列腺癌的ELISA試劑盒及檢測方法。

為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：

用于檢測去勢抵抗性前列腺癌的ELISA試劑盒，包括分別包被ACTG1抗體、β-actin抗體和FGγ抗體的ELISA酶標板；標準品；樣本稀釋液；生物素標記的ACTG1抗體、β-actin抗體和FGγ抗體；親和素標記的辣根過氧化物酶；洗滌液；底物溶液；反應終止液和覆膜。

進一步的，所述樣本稀釋液制備過程如下：取100mLPBS溶液，向其加入2g BSA，至最終質量濃度為2％，充分混勻，避免起泡。

進一步的，所述洗滌液的制備過程如下：將0.5mL 0.05％Tween-20加入到1000mL PBS緩沖液中。

進一步的，所述分別包被ACTG1抗體、β-actin抗體和FGγ抗體的ELISA酶標板中的包被抗體濃度為1-100μg/mL，所述生物素標記的ACTG1抗體、β-actin抗體和FGγ抗體的濃度為0-100μg/mL，所述親和素標記的辣根過氧化物酶濃度0.0001-0.0005mg/mL，所述樣品為前列腺癌患者的血清；所述底物溶液為TMB(四甲基聯苯胺)的質量濃度為0.01％；所述反應終止液為2mol/L H₂SO₄。

進一步的，所述分別包被ACTG1抗體、β-actin抗體和FGγ抗體的ELISA酶標板中的包被抗體濃度優選為10μg/mL。

進一步的，所述生物素標記的ACTG1抗體、β-actin抗體和FGγ抗體的濃度優選10μg/mL。

用于檢測去勢抵抗性前列腺癌的ELISA試劑盒的檢測方法，包括以下步驟：

步驟一：采集前列腺癌患者全血樣品，2000rpm 20min離心，取上清液，收集血液的試管為一次性的無熱原、無內毒素的試管；

步驟二：將各試劑平衡至室溫，待測樣品孔每孔分別加樣品血清100μL，每個樣品平行檢測2孔，同時設空白孔、標準品對照各兩孔，取標準品β-actin 10ng、ACTG1 2000pg、FGγ1000ng各100μL分別加入反應孔中，空白對照孔僅加入100μL樣品稀釋液；酶標板加覆膜，37℃孵育90min；

步驟三：棄去孔內液體，甩干；三個檢測板每孔分別加入生物素標記的ACTG1抗體、β-actin抗體和FGγ抗體各100μL，酶標板加覆膜，37℃溫育1h；

步驟四：棄去孔內液體，甩干，洗滌酶標板1-5次，每次用洗滌液浸泡1-2min，再甩干；

步驟五：每孔加入親和素標記的辣根過氧化物酶100μL，酶標板加覆膜，37℃溫育30min；

步驟六：棄去孔內液體，甩干，洗滌酶標板3-7次，每次用洗滌液浸泡1-2min，再甩干；

步驟七：每孔加入底物溶液(TMB)90μL，酶標板加覆膜，37℃避光孵育15-30min；

步驟八：每孔加入反應終止液50μL，終止反應，此時藍色變為黃色；