[發(fā)明專利]一種同時(shí)測(cè)定復(fù)方丹參提取物或相關(guān)藥材中31種成分的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610969524.0
• 申請(qǐng)日: 2016-10-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107991399B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-03-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 佟玲;李云飛;李東翔;孫萬(wàn)陽(yáng);蘆勤瑋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天士力醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/89
• 代理公司: 北京華科聯(lián)合專利事務(wù)所(普通合伙) 11130
• 代理人: 王為

1.一種同時(shí)測(cè)定復(fù)方丹參提取物或相關(guān)藥材中31種成分的方法，該方法采用的是直接串聯(lián)-反相-親水作用色譜質(zhì)譜聯(lián)用法，

包括以下步驟：

步驟1樣品溶液的制備：取復(fù)方丹參提取物或相關(guān)藥材，用甲醇配制成甲醇溶液；

步驟2標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的制備：分別取31種成分的標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇配制成甲醇溶液；

步驟3內(nèi)標(biāo)溶液的制備：取內(nèi)標(biāo)物L(fēng)-賴氨酸-4,4,5,5-d₄、地西泮和氯霉素，分別用甲醇配制成甲醇溶液；

步驟4供試品溶液的制備：將步驟1或步驟2所得溶液分別與步驟3的內(nèi)標(biāo)溶液混合；

步驟5取步驟4所得溶液注入直接串聯(lián)反相-親水作用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)，得到31種分析物的提取離子流圖，根據(jù)提取離子流圖計(jì)算復(fù)方丹參提取物或相關(guān)藥材中31種成分的含量；

其中，色譜條件如下：

反相色譜柱使用亞2μm C18填料的色譜柱，保護(hù)柱使用粒徑2μm的Waters在線過(guò)濾器，流動(dòng)相A1為10.08-0.15％甲酸或醋酸水，流動(dòng)相B1為乙腈，梯度程序?yàn)椋?min，25％B1；0.5min，25％B1；1.0min，35％B1；5.0min，60％B1；10.0min，80％B1；15.0min，80％B1，流速0.1-0.12mL/min，柱溫25-45℃，進(jìn)樣量1-3μL；

親水作用色譜柱使用亞2μm親水色譜柱，保護(hù)柱使用粒徑2μm的Waters在線過(guò)濾器，流動(dòng)相A2為0.08-0.15％甲酸或醋酸水，流動(dòng)相B2為乙腈，梯度程序?yàn)椋?min，97％B2；10.0min，50％B2；10.5min，50％B2；11.0min，97％B2；15.0min，97％B2；流速0.35-0.45mL/min，柱溫25-45℃；反相色譜柱和親水作用色譜柱通過(guò)一個(gè)三通連接；

反相親水柱共用同一個(gè)流動(dòng)相體系；

所述的質(zhì)譜條件如下：

使用電噴霧離子化接口與親水作用色譜柱連接，正離子毛細(xì)管電壓設(shè)置為5500V，負(fù)離子毛細(xì)管電壓設(shè)置為-4500V；離子源溫度設(shè)置為550℃；霧化氣、加熱氣和氣簾氣使用高純度氮?dú)猓O(shè)置壓力分別為55、55和25psi，使用正負(fù)離子切換結(jié)合時(shí)程多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方法定量分析待測(cè)物；

其中相關(guān)藥材選自：丹參或三七，

其中的31種有效成分分別為：腺嘌呤、琥珀酸、焦谷氨酸、腺苷、尿苷、丹參素、纈氨酸、賴氨酸、脯氨酸、原兒茶醛、葡萄糖、蔗糖、精氨酸、丹酚酸D、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、迷迭香酸、三糖、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、人參皂苷Rb1、丹酚酸C、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rd、四糖、隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮IIA。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，其中步驟1樣品溶液的制備方法為：分別取復(fù)方丹參浸膏、丹參浸膏、三七浸膏、丹參粉末或三七粉末0.10g，精密稱定，加入60-80％甲醇8-12mL，超聲處理20-40min，按照16,000rpm離心8-12min，過(guò)0.22μm濾膜，所有溶液在分析前均保存在4℃冰箱中。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，其中步驟1樣品溶液的制備方法為：分別取復(fù)方丹參浸膏、丹參浸膏、三七浸膏、丹參粉末或三七粉末0.10g，精密稱定，加入70％甲醇10mL，超聲處理30min，按照16,000rpm離心10min，過(guò)0.22μm濾膜，所有溶液在分析前均保存在4℃冰箱中。