[發明專利]一種pH不敏感熒光蛋白標記的生物組織的熒光控制方法有效
| 申請號： | 201610967343.4 | 申請日： | 2016-10-31 |
| 公開（公告）號： | CN106525791B | 公開（公告）日： | 2019-05-14 |
| 發明（設計）人： | 劉秀麗;周宏福;劉靈;呂曉華;曾紹群 | 申請（專利權）人： | 華中科技大學 |
| 主分類號： | G01N21/64 | 分類號： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 華中科技大學專利中心 42201 | 代理人： | 許恒恒 |
| 地址： | 430074 湖北*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 生物組織 熒光 熒光淬滅 淬滅 紅色熒光蛋白 激活 金屬離子螯合劑 化學試劑 熒光蛋白 氫離子 過渡態金屬離子 過渡金屬離子 熒光蛋白標記 氫氧根離子 背景熒光 標記生物 層析成像 不敏感 成像 應用 | ||
1.一種紅色熒光蛋白DsRed標記生物組織的熒光控制方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)熒光淬滅：采用淬滅化學試劑將紅色熒光蛋白DsRed標記的生物組織的熒光淬滅，得到熒光淬滅的生物組織，所述淬滅化學試劑包括過渡態金屬離子，所述淬滅化學試劑的pH為3～6；所述淬滅化學試劑為過渡態金屬離子化合物的水溶液和酸的混合溶液；
(2)熒光重激活：采用重激活化學試劑將步驟(1)所述的熒光淬滅的生物組織的熒光重激活，所述重激活化學試劑包括金屬離子螯合劑，所述重激活化學試劑的pH為10～13；
所述重新激活后的熒光強度最高是淬滅狀態的熒光強度的20倍以上。
2.如權利要求1所述熒光控制方法，其特征在于，所述淬滅化學試劑為過渡態金屬離子化合物的水溶液和醋酸的混合溶液。
3.如權利要求2所述的熒光控制方法，其特征在于，所述過渡態金屬離子為Cr2+、Mn2+、Fe2+、Fe3+、Co2+、Ni2+、Cu+和Cu2+中的一種或多種。
4.如權利要求1所述的熒光控制方法，其特征在于，所述過渡態金屬離子的濃度為10mM至500mM。
5.如權利要求1所述的熒光控制方法，其特征在于，所述重激活化學試劑為金屬離子螯合劑與堿的混合溶液。
6.如權利要求5所述的熒光控制方法，其特征在于，所述堿為碳酸鈉、氫氧化鈉或氫氧化鉀。
7.如權利要求5所述的熒光控制方法，其特征在于，所述金屬離子螯合劑為EDTA-Na4、EDTA-Na3和二乙二胺中的一種或多種。
8.如權利要求1所述的熒光控制方法，其特征在于，所述重激活化學試劑為原卟啉鈉和堿的混合溶液。
9.如權利要求1所述的熒光控制方法，其特征在于，所述金屬離子螯合劑的濃度為100mM至500mM。
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