[發(fā)明專(zhuān)利]一種組合物及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610954734.2
• 申請(qǐng)日: 2016-10-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107988154B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-11-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬玉國(guó)
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣州航華生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/078
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/078
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 楊炳財(cái);屈慧麗

本發(fā)明屬于細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種組合物及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種組合物，本發(fā)明還提供了一種上述組合物的制備方法，本發(fā)明還提供了一種上述組合物或上述制備方法得到的產(chǎn)品在體外培養(yǎng)免疫細(xì)胞中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的技術(shù)方案中，組合物和/或制備方法制得的產(chǎn)品成分明確，不含動(dòng)物源成分，具有：適合免疫細(xì)胞生長(zhǎng)、無(wú)病原污染、不同批次間差異小、質(zhì)量可控以及成本低的優(yōu)點(diǎn)。解決了現(xiàn)有技術(shù)中，無(wú)血清培養(yǎng)基，主要為進(jìn)口產(chǎn)品，具有價(jià)格昂貴的技術(shù)缺陷。本發(fā)明提供的技術(shù)方法，有效降低了免疫細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)成本，對(duì)于腫瘤細(xì)胞免疫治療起到了很好的推廣促進(jìn)作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種組合物及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

腫瘤細(xì)胞免疫治療是繼手術(shù)切除、化療和放療外的新一代腫瘤治療技術(shù)，它的原理是向腫瘤患者體內(nèi)輸入具有抗腫瘤活性的免疫細(xì)胞，特異性或非特異性直接殺傷腫瘤細(xì)胞或激發(fā)機(jī)體免疫應(yīng)答殺傷腫瘤細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞免疫治療包括抽血、培養(yǎng)和回輸三個(gè)過(guò)程。首先，抽取患者的血液；然后，分離血液中的外周血單個(gè)核細(xì)胞，在細(xì)胞因子的作用下擴(kuò)增培養(yǎng)；最后，回輸?shù)交颊唧w內(nèi)。

免疫細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)是整個(gè)過(guò)程中耗時(shí)最長(zhǎng)的步驟，免疫細(xì)胞培養(yǎng)需要消耗大量培養(yǎng)基。目前，實(shí)驗(yàn)室常用的免疫細(xì)胞培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)基加血清組成。基礎(chǔ)培養(yǎng)基用于提供基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，常用RPMI-1640；血清用于提供激素、結(jié)合蛋白等基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有的功能分子，常用10％胎牛血清。動(dòng)物血清供應(yīng)充足，價(jià)格相對(duì)便宜，但由于培養(yǎng)后的細(xì)胞要回輸人體，可能導(dǎo)致人體排異反應(yīng)，且可能傳播疾病。人血清供應(yīng)有限，價(jià)格昂貴，也有傳播疾病風(fēng)險(xiǎn)。血清中含有的未知成分可能帶來(lái)未知的不良影響。因此，用無(wú)血清培養(yǎng)基代替血清培養(yǎng)基是發(fā)展趨勢(shì)。現(xiàn)有技術(shù)中的無(wú)血清培養(yǎng)基，主要為進(jìn)口產(chǎn)品，具有價(jià)格昂貴的技術(shù)缺陷，導(dǎo)致免疫細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)成本高昂，對(duì)于腫瘤細(xì)胞免疫治療有很大的阻滯作用。

因此，研發(fā)出一種組合物及其制備方法與應(yīng)用，用于解決現(xiàn)有技術(shù)中，無(wú)血清培養(yǎng)基，主要為進(jìn)口產(chǎn)品，具有價(jià)格昂貴的技術(shù)缺陷，導(dǎo)致免疫細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)成本高昂，對(duì)于腫瘤細(xì)胞免疫治療有很大的阻滯作用，成為了本領(lǐng)域技術(shù)人員亟待解決的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種組合物及其制備方法與應(yīng)用，用于解決現(xiàn)有技術(shù)中，無(wú)血清培養(yǎng)基，主要為進(jìn)口產(chǎn)品，具有價(jià)格昂貴的技術(shù)缺陷。本發(fā)明提供的技術(shù)方法，有效降低了免疫細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)成本，對(duì)于腫瘤細(xì)胞免疫治療起到了很好的推廣促進(jìn)作用。

本發(fā)明提供了一種組合物，所述組合物的原料包括：RPMI-1640、NaHCO₃、HEPES、L-谷氨酰胺、丙酮酸鈉、亞油酸、乙醇胺、亞硒酸鈉、人血白蛋白、人轉(zhuǎn)鐵蛋白、人胰島素和植物血凝素。

優(yōu)選地，所述組合物的原料包括：RPMI-1640 10.4g/L、NaHCO₃ 2g/L、HEPES 2.38～5.95g/L、L-谷氨酰胺300mg/L、丙酮酸鈉110mg/L、亞油酸5～10mg/L、乙醇胺1～3mg/L、亞硒酸鈉5～10μg/L、人血白蛋白0.5～2g/L、人轉(zhuǎn)鐵蛋白5～20mg/L、人胰島素5～20mg/L和植物血凝素2～20mg/L。

優(yōu)選地，所述組合物的原料包括：RPMI-1640 10.4g/L、NaHCO₃ 2g/L、HEPES4.76g/L、L-谷氨酰胺300mg/L、丙酮酸鈉110mg/L、亞油酸7.5mg/L、乙醇胺2mg/L、亞硒酸鈉7.5μg/L、人血白蛋白1g/L、人轉(zhuǎn)鐵蛋白10mg/L、人胰島素10mg/L和植物血凝素10mg/L。

本發(fā)明還提供了一種包括以上任意一項(xiàng)所述組合物的制備方法，所述制備方法為：

步驟一、備液：配制人轉(zhuǎn)鐵蛋白PBS儲(chǔ)液，配置植物血凝素PBS儲(chǔ)液，配制人胰島素HCl儲(chǔ)液，配制亞硒酸鈉水溶液和乙醇胺水溶液，配制亞油酸-人血白蛋白混合液；