[發(fā)明專利]一種組合物及其制備方法與應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610954734.2
• 申請日: 2016-10-27
• 公開（公告）號: CN107988154B
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發(fā)明（設計）人: 馬玉國
• 申請（專利權）人: 廣州航華生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權代理有限公司 11227
• 代理人: 楊炳財;屈慧麗

1.一種組合物的制備方法，其特征在于，所述組合物的原料由以下組分構成：RPMI-164010.4g/L、NaHCO₃2g/L、HEPES 2.38～5.95g/L、L-谷氨酰胺300mg/L、丙酮酸鈉110mg/L、亞油酸5～10mg/L、乙醇胺1～3mg/L、亞硒酸鈉5～10μg/L、人血白蛋白0.5～2g/L、人轉(zhuǎn)鐵蛋白5～20mg/L、人胰島素5～20mg/L和植物血凝素2～20mg/L；

所述制備方法為：

步驟一、備液：配制人轉(zhuǎn)鐵蛋白PBS儲液，配置植物血凝素PBS儲液，配制人胰島素HCl儲液，配制亞硒酸鈉水溶液和乙醇胺水溶液，配制亞油酸-人血白蛋白混合液；

其中，人胰島素HCl儲液中，所述HCl的濃度為0.01M，所述亞油酸—人血白蛋白混合液中，所述人血白蛋白的濃度為20％；

步驟二、溶解：將RPMI-1640、NaHCO₃、HEPES、L-谷氨酰胺和丙酮酸鈉溶于水中，得第一產(chǎn)物；

步驟三、混合：所述第一產(chǎn)物與所述人轉(zhuǎn)鐵蛋白PBS儲液、所述植物血凝素PBS儲液、所述人胰島素HCl儲液、所述亞硒酸鈉水溶液、所述乙醇胺水溶液和所述亞油酸-人血白蛋白混合液混合，得第二產(chǎn)物；

步驟四、調(diào)pH：調(diào)節(jié)所述第二產(chǎn)物的pH至7.2，得第三產(chǎn)物；

其中，調(diào)節(jié)pH所使用的試劑為HCl溶液和/或NaOH溶液；

所述HCl溶液的濃度為1M，所述NaOH溶液的濃度為1M；

步驟五、定容：所述第三產(chǎn)物定容；

步驟六、滅菌：用正壓過濾器以0.22μm孔的濾膜過濾除菌，得產(chǎn)品；

所述第一產(chǎn)物與所述產(chǎn)品的體積比為4:5。

2.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述組合物的原料由以下組分構成：RPMI-164010.4g/L、NaHCO₃2g/L、HEPES 4.76g/L、L-谷氨酰胺300mg/L、丙酮酸鈉110mg/L、亞油酸7.5mg/L、乙醇胺2mg/L、亞硒酸鈉7.5μg/L、人血白蛋白1g/L、人轉(zhuǎn)鐵蛋白10mg/L、人胰島素10mg/L和植物血凝素10mg/L。

3.一種權利要求1或2所述制備方法得到的產(chǎn)品在體外培養(yǎng)免疫細胞中的應用。