[發明專利]一種乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶共交聯酶聚集體的制備方法

有效

• 申請號: 201610949314.5
• 申請日: 2016-10-26
• 公開（公告）號: CN107988201B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 邵雷;陳代杰;胡曉植;鄭昆;張駿梁
• 申請（專利權）人: 上海醫藥工業研究院;中國醫藥工業研究總院
• 主分類號: C12N11/18
• 分類號: C12N11/18;C12P5/00
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 陳詳;馬思敏

1.一種乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶共交聯酶聚集體的制備方法，其特征在于，所述方法中包括步驟：

(1)提供含有乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶的混合物；

其中，所述混合物是通過下述方法制備的：在基因工程菌中共表達乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶，從而獲得所述含有乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶的粗酶液；取所述粗酶液與沉淀劑混合，使得所述乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶發生沉淀，從而獲得所述含有乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶的混合物；其中，

所述沉淀劑為55％～100％v/v的丙酮水溶液；且

所述沉淀劑和所述粗酶液的體積為10～20：2～4；

(2)交聯反應，制備交聯反應體系，在表面活性劑存在的條件下，經交聯劑進行步驟(1)提供的乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶的共交聯反應；0℃～40℃條件下進行交聯反應，從而制得所述乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶共交聯酶聚集體；

其中，所述表面活性劑為吐溫80；

所述交聯反應中使用戊二醛作為交聯劑；且

所述交聯反應體系內交聯劑和底物酶乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶之和的質量比為0.2～1.2：0.5～1。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述交聯反應體系內交聯劑和底物酶乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶之和的質量比為0.2～1.2：1。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中，進行所述共交聯反應的交聯反應體系內表面活性劑和底物酶乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶之和的質量比為0.1～1.2：0.5～1。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，進行所述共交聯反應的交聯反應體系內表面活性劑和底物酶乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶之和的質量比為0.2～1：0.5～1。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述交聯反應體系內交聯劑和底物酶乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶之和的質量比為0.5～1.0：1。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，交聯反應中表面活性劑：交聯劑：底物酶乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶之和的質量比為0.4-0.8：0.8-1.2：0.8-1.2。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括步驟：

所述交聯反應體系內交聯劑和底物酶乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶之和的質量比為0.5：1。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶的混合物中，乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶的質量比為：0.5～1：0.5～1。

9.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，包括步驟：

所述沉淀劑為80％～95％丙酮水溶液。

10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述沉淀劑和所述粗酶液的體積為20：4。

11.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，包括步驟：

向步驟(1)中獲得的所述含有乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶的混合物中加入交聯劑戊二醛水溶液，然后加入吐溫80。

12.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述戊二醛水溶液的濃度為1％～5％v/v。

13.如權利要求1所述的方法，其特征在于，

所述沉淀劑為80％～95％v/v的丙酮水溶液；

所述交聯反應體系內交聯劑和底物酶乙醇脫氫酶和葡萄糖脫氫酶之和的質量比為0.5～1.0：1。