[發(fā)明專利]一種針對伏馬毒素B1的靈敏檢測方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610944743.3 | 申請日： | 2016-11-02 |
| 公開（公告）號： | CN106645686B | 公開（公告）日： | 2018-08-17 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 熊勇華;周耀峰;黃小林;李響敏;江湖;賴衛(wèi)華 | 申請（專利權(quán)）人： | 南昌大學(xué) |
| 主分類號： | G01N33/533 | 分類號： | G01N33/533;G01N33/543;G01N33/58 |
| 代理公司： | 南昌新天下專利商標(biāo)代理有限公司 36115 | 代理人： | 劉華 |
| 地址： | 330031 江西省*** | 國省代碼： | 江西;36 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 熒光微球 量子點 毒素 包埋 競爭抗原 靈敏檢測 靈敏度 偶聯(lián) 高聚物載體 競爭性抗原 競爭ELISA 包被抗體 發(fā)光特性 技術(shù)路線 偶聯(lián)產(chǎn)物 常規(guī)的 酶載體 有效地 檢測 親和力 包被 粒徑 替代 | ||
1.一種針對伏馬毒素B1的靈敏檢測方法，其特征在于包括以下步驟：
1)在酶標(biāo)板上包被抗體；
2)以氯仿為溶劑，配制油酸基團修飾的量子點濃度為15～25mg/mL、PMMA濃度為25～35mg/mL、PMAO濃度為15～25mg/mL的混合溶液，保持25～35min，而后將取十二烷基磺酸鈉水溶液與所述混合溶液混合至其中油酸基團修飾的量子點濃度為3～4mg/mL，混合均勻后去除氯仿，固液分離取固相，即得到標(biāo)記有羧基修飾的量子點的熒光微球；
3)利用牛血清白蛋白包被標(biāo)記有羧基修飾的量子點的熒光微球，將包被產(chǎn)物與伏馬毒素B1偶聯(lián)，即得到競爭抗原；
4)將待測溶液與所述競爭抗原加入至步驟1)包被有抗體的酶標(biāo)板中，抗原抗體結(jié)合反應(yīng)，而后檢測酶標(biāo)板的熒光強度；
步驟3)中，所述利用牛血清白蛋白包被標(biāo)記有羧基修飾的量子點的熒光微球，包括以下步驟：在磷酸鹽緩沖液中將標(biāo)記有羧基修飾的量子點的熒光微球與1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺、牛血清白蛋白混合，至溶液中牛血清白蛋白的質(zhì)量體積分數(shù)為0.8％～1.2％，于35～39℃反應(yīng)25～35min，而后補加1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺3～5次，每次補加后于35～39℃反應(yīng)25～35min，補加全部完成后固液分離取固相，洗滌后溶解于碳酸氫鈉溶液中；
步驟3)中，所述偶聯(lián)包括以下步驟：在無水四氫呋喃環(huán)境下，取二環(huán)己基碳二亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺、伏馬毒素B1混合活化；收集活化后的伏馬毒素B1，按照活化后的伏馬毒素B1與所述包被產(chǎn)物上牛血清白蛋白二者摩爾比為1:8～1:12將伏馬毒素B1與所述包被產(chǎn)物混合，在pH為8.4～8.8、室溫條件下反應(yīng)10～14h，收集產(chǎn)物，洗滌后溶解于水中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種針對伏馬毒素B1的靈敏檢測方法，其特征在于所述量子點是CdSe/ZnS量子點。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種針對伏馬毒素B1的靈敏檢測方法，其特征在于所述量子點的激發(fā)波長為450nm、發(fā)射波長為580nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種針對伏馬毒素B1的靈敏檢測方法，其特征在于所述標(biāo)記有羧基修飾的量子點的熒光微球，其粒徑為250nm，其最大熒光發(fā)射波長580nm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種針對伏馬毒素B1的靈敏檢測方法，其特征在于氯仿的去除是利用旋蒸實現(xiàn)的。
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