[發(fā)明專利]氨基化石墨烯量子點(diǎn)/BSA復(fù)合探針檢測(cè)胰蛋白酶的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610932940.3
• 申請(qǐng)日: 2016-10-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106568749B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-03-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉燕;胡肖;劉占超;倪良;吳維富
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明提供了一種氨基化石墨烯量子點(diǎn)/BSA復(fù)合探針檢測(cè)胰蛋白酶的方法，包括如下步驟：步驟1、氨基化石墨烯量子點(diǎn)的制備；步驟2、氨基化石墨烯量子點(diǎn)/牛血清蛋白復(fù)合探針的制備；步驟3、熒光測(cè)試；步驟4、胰蛋白酶的檢測(cè)。本發(fā)明制備的氨基化石墨烯量子點(diǎn)/牛血清蛋白復(fù)合探針具有制備方法簡(jiǎn)單，熒光穩(wěn)定性強(qiáng)的特點(diǎn)。對(duì)胰蛋白酶的檢測(cè)具有操作簡(jiǎn)便、快速及高靈敏性，在疾病的診斷與治療方面具有廣闊的應(yīng)用前景。這為快速高效檢測(cè)胰腺病人的胰蛋白酶含量提供了一種新方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種氨基化石墨烯量子點(diǎn)/BSA復(fù)合探針檢測(cè)胰蛋白酶的方法，屬于熒光探針材料檢測(cè)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

急性胰腺炎(AP)是一種致命的疾病，歸為持續(xù)性胰腺炎疾病。整體的急性胰腺炎病人的死亡率在7％左右，記錄確診的病例數(shù)目還在急劇增長(zhǎng)。然而，AP的診治仍然是一個(gè)很大的挑戰(zhàn)因?yàn)槿狈μ厥獠“Y和研究成熟的生物標(biāo)記的臨床信號(hào)。研發(fā)一種在活體檢查確診之前能夠有效、快速、可靠的篩選診斷AP是很有必要的。胰蛋白酶是胰腺中的一種消化酶，含量主要是由胰腺分泌的胰蛋白酶抑制劑控制的，過(guò)表達(dá)的胰蛋白酶會(huì)引起多種蛋白酶的過(guò)表達(dá)最終摧毀細(xì)胞。過(guò)表達(dá)的胰蛋白酶通常從胰腺炎病人的尿液中進(jìn)行檢測(cè)，因此尿液樣本中的定量檢測(cè)被認(rèn)為是胰腺炎篩選的無(wú)創(chuàng)標(biāo)記。酶聯(lián)免疫吸附法是胰蛋白酶檢測(cè)的一種普遍方法，然而，這種方法昂貴，耗時(shí)并且通常要求樣本數(shù)量較多。樣品預(yù)分析凈化過(guò)程會(huì)導(dǎo)致樣品的損失，因此會(huì)犧牲檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。基于熒光的檢測(cè)方法是另外一種蛋白酶定量檢測(cè)的方法。在過(guò)去的10年中，基于生物分析的熒光檢測(cè)的方法被廣泛用于檢測(cè)蛋白水解酶、蛋白質(zhì)、核酸、小分子等，同時(shí)這種方法也提供了一種有效花費(fèi)快速檢測(cè)酶的方法。在所有的熒光納米材料中，量子點(diǎn)被廣泛用于生物傳感。

量子點(diǎn)是一種能夠在激發(fā)光激發(fā)下產(chǎn)生熒光的零維納米材料，其半徑小于或接近波爾半徑。由于量子點(diǎn)的粒徑很小，存在量子限域效應(yīng)，連續(xù)能級(jí)結(jié)構(gòu)變成具有分子特性的能級(jí)結(jié)構(gòu)，從而發(fā)射出強(qiáng)烈的熒光。由于量子點(diǎn)的尺寸效應(yīng)和介電效應(yīng)，量子點(diǎn)的發(fā)光表現(xiàn)出獨(dú)一無(wú)二的性質(zhì)。量子點(diǎn)發(fā)光的特性主要有：具有較寬的激發(fā)光譜、可以通過(guò)尺寸控制調(diào)節(jié)熒光、具有較高的光穩(wěn)定性已經(jīng)具有較長(zhǎng)的熒光壽命。量子點(diǎn)具有豐富的標(biāo)記顏色，較高的發(fā)光強(qiáng)度以及較長(zhǎng)的觀察時(shí)間等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)使其成為可以替代有機(jī)熒光染料做為熒光探針，應(yīng)用于生物成像、生物檢測(cè)和環(huán)境檢測(cè)中。但是由于半導(dǎo)體量子點(diǎn)具有一定的生物毒性，貴金屬納米簇的價(jià)格昂貴限制了其生物方面的應(yīng)用。相比之下，一些低毒性的量子點(diǎn)如硅量子點(diǎn)、碳量子點(diǎn)和石墨烯量子點(diǎn)在生物檢測(cè)中具有廣闊的應(yīng)用前景。其中石墨烯量子點(diǎn)(Wang Y,Zhang L,Liang R P,et al.Using graphene quantum dots asphotoluminescent probes for protein kinase sensing[J].Analytical chemistry,2013,85(19):9148-9155.)由于其獨(dú)特物理化學(xué)性質(zhì)在生物檢測(cè)方面引起的廣泛的研究。Hu等(Hu L,Han S,Parveen S,et al.Highly sensitive fluorescent detection oftrypsin based on BSA-stabilized gold nanoclusters[J].Biosensors andBioelectronics,2012,32(1):297-299.)報(bào)道了使用BSA穩(wěn)定的金納米簇檢測(cè)胰蛋白酶，加入胰蛋白酶以后，BSA穩(wěn)定的金納米簇的熒光強(qiáng)度明顯減弱，同時(shí)量子點(diǎn)的生物相容性增強(qiáng)，根據(jù)熒光強(qiáng)度的變化可以檢測(cè)出胰蛋白酶的濃度。但是這種方法中納米金屬于貴金屬，檢測(cè)成本高。Poon等(Poon C Y,Li Q,Zhang J,et al.FRET-based modified graphenequantum dots for direct trypsin quantification in urine[J].Analytica chimicaacta,2016,917:64-70.)報(bào)道了一種利用石墨烯量子點(diǎn)的熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測(cè)胰蛋白酶的方法，但是熒光共振能量轉(zhuǎn)移對(duì)的選擇和連接仍然是熒光共振能量轉(zhuǎn)移的一大問(wèn)題。因此，研究出簡(jiǎn)易的、低成本的胰蛋白酶的檢測(cè)方法對(duì)于胰腺炎等相關(guān)疾病的檢測(cè)具有重要的研究意義。